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微生物限度检查法操作规程

1总则

1.1制定目的

为规范微生物限度检查的操作行为，明确检查流程、技术要求及质量控制标准，确保检查结果准确、可靠、可追溯，保障药品、食品、化妆品等产品的质量安全。依据《中华人民共和国药典》（现行版）、《食品微生物学检验总则》（GB4789.2-2022）、《化妆品安全技术规范》（现行版）等相关法规标准及本单位实际，制定本规程。

1.2适用范围

本规程适用于本单位开展的药品（非无菌制剂）、食品、化妆品等产品的微生物限度检查工作，包括细菌数、霉菌和酵母菌数计数，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等控制菌检查；覆盖从样品接收、检验准备、样品处理、培养计数、控制菌检查到结果判定与记录的全流程。

本规程适用于所有从事微生物限度检查的检验人员、实验室管理人员及相关质量控制人员。

1.3核心术语定义

1.3.1微生物限度：指非无菌产品中允许存在的微生物最大数量或种类限制。

1.3.2计数培养基适用性检查：确认所用培养基对目标微生物的生长支持能力及抑制杂菌能力的验证试验。

1.3.3控制菌：指在产品中不得检出或有严格限量要求的特定微生物，其存在可能对人体健康造成危害。

1.3.4稀释级：为降低样品中微生物浓度，便于准确计数，将样品按一定比例逐步稀释后的不同浓度等级。

1.4职责分工

1.4.1检验人员：经专项培训考核合格后上岗，严格按本规程及检验任务单开展操作；负责检验前设备、培养基、试剂的准备与检查；规范完成样品处理、培养、计数、结果观察等工作；准确填写检验记录，对检验数据的真实性、准确性负责。

1.4.2实验室管理人员：统筹实验室日常管理工作，确保检验环境、设备、试剂符合要求；组织开展检验人员培训及能力验证；监督本规程执行情况；负责检验设备的维护保养计划制定与实施。

1.4.3质量控制人员：负责检验过程的质量监督，审核检验记录及报告；组织开展检验方法验证与确认；处理检验过程中的质量问题，确保检验结果可靠。

1.4.4样品接收人员：负责样品的接收、登记、标识及储存，核对样品信息（名称、批号、数量、检验项目、送检日期）的完整性，确保样品在规定条件下保存，及时将样品移交检验人员。

1.5核心安全与质量原则

1.5.1无菌操作原则：检验过程中涉及样品处理、培养基接种等关键环节，必须在无菌环境下进行，防止交叉污染及外源微生物引入。

1.5.2平行操作原则：计数试验需设置平行样，控制菌检查需设置阳性对照、阴性对照，确保检验结果的准确性与可靠性。

1.5.3环境可控原则：微生物实验室需划分清洁区、半污染区、污染区，温湿度、洁净度需符合规定要求，定期监测并记录。

1.5.4可追溯原则：所有检验过程（样品信息、设备使用、试剂批号、操作步骤、检验数据）均需详细记录，确保全程可追溯。

1.5.5安全防护原则：检验人员需按要求穿戴个人防护用品，规范处理含菌废弃物，防范微生物感染及化学试剂伤害。

2检验前准备

2.1环境准备

2.1.1检验需在洁净度不低于10000级、局部洁净度100级的无菌室或超净工作台内进行；提前30分钟开启洁净室净化系统或超净工作台，待环境参数（温度18-26℃，相对湿度45%-65%）稳定后开始操作。

2.1.2每日操作前，用符合要求的消毒剂（如75%乙醇）对超净工作台台面、无菌室地面、墙壁、设备表面进行擦拭消毒；操作结束后，再次进行全面消毒，关闭净化系统前需开启紫外线灯照射30分钟以上，对环境进行灭菌。

2.1.3定期对无菌室及超净工作台的洁净度、沉降菌进行监测，监测结果需符合规定要求，监测记录归档保存。

2.2设备准备

2.2.1检查所需设备（超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、霉菌培养箱、生物安全柜、显微镜、天平、离心机、移液器）的状态，确认设备已按要求校准，运行正常，温度、转速等参数符合检验要求。

2.2.2高压蒸汽灭菌器使用前，检查水位、安全阀、压力表功能正常；灭菌结束后，确认灭菌温度、时间达到规定要求（通常121℃、15-20分钟），并记录灭菌参数。

2.2.3移液器需按检验需求选择合适量程，使用前用75%乙醇擦拭消毒枪头及枪身，确保无菌；天平需置于水平、无振动的环境中，预热后进行校准。

2.3培养基与试剂准备

2.3.1所用培养基（如营养琼脂培养基、玫瑰红钠培养基、麦康凯培养基、胆盐乳糖培养基）需符合相关标准要求，具有合格证明；按培养基说明书要求准确称量，加入适量纯化水，加热溶解，调节pH值至规定范围（通常为7.2-7.4）。

2.3.2培养基需经高压蒸汽灭菌处理，灭菌后及时取出，冷却至45-50℃时倾倒平板或分装，避免凝固；倾注平板时，确保平板厚度均匀（约20ml/90mm平板），冷却后倒置储存于2-8℃冰箱，储存时