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附件1

化妆品中微生物检验方法总则（征求意见稿）

GeneralGuidelinesforMicrobiologicalExaminationMethodsinCosmetics

1范围

本部分规定了化妆品微生物学检验的基本要求。

本部分适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备及质量控制。

2实验室基本要求

2.1环境

2.1.1实验室环境应不影响检验结果的准确性。

2.1.2实验室的工作区域应与办公室区域应明显分开。

2.1.3实验室工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要。

2.1.4病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室（Biosafetylevel2,BSL-2）进行，实验室内环境应符合二级生物安全实验室的要求。

2.2人员

2.2.1检验人员应具有相应的微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。

2.2.2检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。

2.2.3检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。

2.2.4检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证自身安全。

2.2.5有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的实验。

2.3仪器和设备

试验设备与仪器应能满足检验工作的需要。

2.3.1天平：0~200g，精确至0.1g。

2.3.2高压灭菌器。

2.3.3振荡器。

2.3.4三角瓶：250mL、150mL。

2.3.5玻璃珠。

2.3.6玻璃棒。

2.3.7灭菌刻度吸管：10mL、1mL。

2.3.8恒温水浴箱。

2.3.9均质器或研钵。

2.3.10灭菌均质袋。

2.3.11恒温培养箱。

2.3.12冰箱。

2.3.13显微镜。

2.4菌株

2.4.1应使用微生物菌种保藏专门机构或同行认可机构保存的、可溯源的标准或参考菌株。

2.4.2必要时，可对从化妆品或环境分离、纯化、鉴定的，未在微生物菌种保藏专门机构登记注册的原始分离菌株（野生菌株）进行系统、完整的菌株信息记录，包括分离时间、来源和菌株的主要表型特征等信息。

2.4.3实验室应保存能满足实验需要的标准或参考菌株，在购入和传代保藏过程中，应进行验证试验。

3培养基及试剂的质量控制

化妆品微生物检验用培养基的质量评价项目包括促生长能力、抑制能力及生化特性，各培养基的检验项目及所用的菌株见表1~4。表中菌株可采用其他等效菌株进行检测。

实验室应针对每批次使用的培养基开展质量控制和评价工作。若生产商能提供由具备相应检验能力且取得国家相关认证认可资质的检验机构出具的同批次产品检验报告，实验室可保留相关证明文件，并根据实际需求对该批次培养基的质量予以评估。对于表2~4中未包含的培养基和试剂，实验室可根据其性能，参考表2~4中建立的方法进行评价。

3.1培养基的促生长能力

3.1.1固体培养基

将表2中规定的试验菌株接种到非选择性肉汤（如TSB）培养基中，培养过夜或采用其他方法（如培养18~24h），制备10倍系列稀释的菌悬液。进行生长率测试时，细菌和酵母菌每平板的接种水平为50~250CFU，霉菌每平板的接种水平为30~150CFU。

选择适宜稀释度的工作菌悬液0.1mL，均匀涂布接种于待测培养基平板和参比培养基平板，也可使用螺旋涂布法或倾注法进行接种。每一稀释度接种两个平板，按表2规定的条件培养。

参考菌落总数的要求，选择菌落数适中的平板进行计数，将两块平板的平均值按下列式（1）计算生长率。生长率一般应不小于0.5。

PR=………（1）

式中：PR——生长率；

NS——待测培养基平板上的菌落总数平均值；

NO——参比培养基平板上的菌落总数平均值。

3.1.2液体培养基

将表3中指定的试验菌株接种到非选择性肉汤培养基中，培养过夜或采用其他方法（如培养18~24h），制备10倍系列稀释的菌悬液。

在装有10mL待测培养基的试管中接种10~100CFU的目标菌，接种体积不超过0.1mL，同时接种两个平行管，混匀。将相同体积的目标菌菌悬液（与试管接种同一稀释度）倾注平板（或适宜稀释度0.1mL涂布平板），接种两个平板，作接种量计数用。按标准规定的培养时间和温度进行培养。

待测培养基经增菌培养，稀释10倍后，取0.1mL涂布TSA平板，平板上的菌落数应不少于100CFU。

3.2培养基的抑制能力

3.2.1选择性固体培养基

将表2指定的试验菌株接种到非选择性肉汤培养基中，培养过夜或其他方法作为工作菌悬液。用1μL接种环取工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线（如图1），同时接种两个平板，按表2指定的条件培养。培养后对培养基计算生