莫洛尼小鼠白血病病毒逆转录酶催化片段克隆、表达、纯化及核酸复合物结晶研究.pdfVIP

克隆、表达和纯化莫洛尼小鼠白血病逆转录

酶的催化片段：复合物的结晶*

斯文・杰森，刘春辉，，尔・纳吉穆丁，米莉・迪斯

瓦克斯曼和化学系，罗格斯大学，皮斯卡特韦，新泽西州08854

（收稿日期：；接受日期：）

逆转录酶是一种必需的逆转录酶，它利用RNNA指NA聚合酶活性

以及RNaseH活性来合成单链R因组的NA拷贝。为了获得关于逆转录

酶聚合酶活性位点的高分辨率结构信息，我们对莫洛尼小鼠白血病逆转录酶

的催化片段进行了研究。编码催化片段的最初通过有限蛋白酶定义，已

被克隆，并在大肠杆菌中表达和纯化。通过有限蛋白酶获得的片段和细菌表

达的片段均保留了聚合酶活性。报告了涉及来自两个的催化片段与复合

物的结晶研究，包括筛选以改善晶体质量和低温冷却的变量。已表征了三种催化

片段‑复合物的晶体形式，所有这些晶体形式在不对称单元中至少包含两个蛋

白质分子。分离出的催化片段为单体。这一分析表明，在存在的情况下，该

酶会二聚化。

：复合物；结晶；DNA；莫洛尼鼠白血病；；聚合酶；逆转录酶

逆转录酶（RT）是一种必需的逆转录酶，它催化从单链逆转RNA基因组形

成双链拷贝（Gilboa等，1979）。RT的酶特性包括RNA和DNA指导的聚合酶活性，

以及一种特定于/RNA杂交体的RNaseH活性，使RT能够完成双链DNA拷贝的合成

off，1990）。新合成的

（G随后由另一种逆转录酶——整合酶整合到宿主基

因组中。根据宿主特异性，逆转录RT可以分为三大：人类、禽类或小鼠。这

三的RT具有相同的功能性特征，但结构不同（Goff，1990）。

Cloning,expression,andpurificationofacatalytic

fragmentofMoloneymurineleukemiavirusreverse

transcriptase:Crystallizationofnucleicacid

complexes*

DUNMINGSUN,SVENJESSEN,CHUNHUILIU,XIUPINGLIU,SHABIRNAJMUDIN,AND

MILLIEM.GEORGIADIS

WaksmanInstituteandDepartmentofChemistry,RutgersUniversity,Piscataway,New

Jersey08854

(RECEIVEDDecember30,1997;ACCEPTEDMarch30,1998)

ReversetranscriptaseisanessentialretroviralenzymethatusesRNA-and-directed

polymeraseactivitiesaswellasanRNaseHactivitytosynthesizeadouble-stranded

copyofthesingle-strandedRNAgenome.Inanefforttoobtainhigh-resolution

structuralinformationregardingthepolymeraseactivesiteofreversetranscriptase,we

havepursuedstudiesonacatalyticfragmentfromMoloneymurineleukemiavirus

reversetranscriptase.encodingthe