CN1588077A 农药西维因快速检测用试纸条及其制作方法与应用 （天津科技大学）.docxVIP

[19]中华人民共和国国家知识产权局

[12]发明专利申请公开说明书

[21]申请号200410071941.0

[51]Int.Cl?

G01N33/549

GO1N33/558G01N33/52

GO1N33/535G01N33/50

[43]公开日2005年3月2日[11]公开号CN1588077A

[22]申请日2004.9.15

[21]申请号200410071941.0

[71]申请人天津科技大学

地址300222天津市河西区大沽南路1038号[72]发明人王硕王俊平张燕

[74]专利代理机构天津市学苑有限责任专利代理事务所

代理人李明

权利要求书3页说明书10页附图2页

[54]发明名称农药西维因快速检测用试纸条及其制作方法与应用

[57]摘要

农药西维因快速检测用试纸条及其制作方法与应用，涉及西维因特异性抗体、及其在固相载体膜上的固定化技术、固相载体膜的处理技术以及在样品检测中的应用。它克服了目前试纸条产品，抗体固定化技术繁琐复杂、成本较高，分析灵敏度较低、精确度和准确度较差，结果不稳定等问题。本发明试纸条为浸有农药西维因抗体的经特殊处理的醋酸纤维膜。它是以高特异性西维因抗体为免疫检测抗体，采用直接竞争酶联免疫检测法，通过溶液流过、浸沾的手段，使抗体、待测样品和酶标抗原在短时间内完成反应，获得检测结果，具有良好的抗干扰能力，检测精度高。本发明还提供了简便、快速、灵敏、准确的试纸条分析技术，具有良好的应用前景，既有经济效益又有社会效益。

知识产权出版社出版

200410071941.0权利要求书第1/3页

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1.农药西维因快速检测试纸条，其特征在于它是浸有农药西维因抗体的条状固相载体膜，其中固相载体膜是经过40-100mmol/L,pH7.0-7.2,含0.6-1.0%的NaCl的Tris缓冲液浸泡预处理的醋酸纤维膜。

2.按照权利要求1所述的农药西维因快速检测试纸条，其特征在于农药西维因抗体采用200410020332.2号专利申请中的西维因抗体，其抗体浓度为1:200000—400000的高特异性农药西维因抗体。

3.按照权利要求1所述的农药西维因快速检测试纸条，其特征在于它分为垂直流过式快速检测试纸条和插入式快速检测试纸条两种，其规格分别为

1.8-2.2cm×4.5-9.0cm或1.5cm×1.0cm。

4.权利要求1所述的农药西维因快速检测试纸条的制作方法，其特征在于是将西维因抗体经过点样、固定、封闭、冲洗工序固定到经过预处理的固相载体膜上，其具体做法如下：

·膜的预处理

将醋酸纤维膜用浓度为40-100mmol/L,pH7.0-7.2,含0.6-1.0%的NaCl的Tris缓冲液浸泡10-30分钟后，取出紧贴于用双蒸水润湿的滤纸上，其具体做法是：

将滤纸用双蒸水润湿后，甩掉多余的水分，紧贴于平滑的塑料板上，然后将用Tris缓冲液已浸泡好的固相载体膜，贴在湿润的滤纸上，膜与滤纸之间紧贴，避光晾干；然后剪成条状，其规格为1.8-2.2cm×4.5-9.0cm,再用笔在固相载体膜上等分出3-6个点样区域，并在每个点样区的中心部位，画出直径为6-10mm的圆形反应区。

·点样

用微量加样枪将50μ1西维因抗体，点加于上述处理好的条状固相载体膜上，且必须点于该膜圆形反应区的中心部位；

·固定

点样完后，先在室温下固定5-10分钟，再在30℃的恒温箱中固定40-60分钟，让抗体在固相载体膜上充分固定。

·封闭

将固定好的抗体的固相载体膜浸泡在1.5%的白明胶磷酸缓冲液(PBS)溶液中5-10分钟，在30℃的恒温箱中封闭10-20分钟；

·冲洗

将封闭好的固相载体膜，用含0.5ml/L吐温-20的磷酸缓冲液(PBS)即PBST洗涤液冲洗三次，轻轻甩掉多余的水分，然后30℃下放置20分钟干燥或将冲洗

200410071941.0权利要求书第2/3页

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后的膜冻干，于4℃下密闭保存。;

通过以上工序即完成了农药西维因快速检测试纸条的制作，该方法所制作的试纸条为垂直流过式快速检测试纸条。

5.权利要求1所述的农药西维因快速检测试纸条的制作方