多肽和蛋白质类药物专家讲座.pptxVIP

Chapter3多肽与蛋白质类药品

;1953年人工合成了第一个有生物活性多肽——催产素以后，20世纪50年代都集中于脑垂体所分泌各种多肽激素研究。

60年代，研究重点转移到控制脑垂体激素分泌各种多肽激素研究。

70年代，神经肽研究进入高潮。生物胚层发育渊源关系表明，很多脑活性肽也存在于肠胃组织中，从而推进了肠胃激素研究进展。;3.1多肽和蛋白质药品基本知识;细胞生长调整因子——在体内和体外对效应细胞生长、增殖和分化起调控作用一类物质。

许多生长因子在靶细胞上有特异性受体，仅微量就有较强生理活性。;生物技术在该类中应用;按起源分

生化药品——起源于动植物有机体

基因工程药品——起源于基因工程菌表示生产药品

习惯分法

多肽生化药品、细胞生长因子、抗体药品、抗菌肽、酶类药品;多肽类激素、多肽抗生素：消化道多肽、下丘脑多肽、脑多肽、激肽等；动、植物蛋白。

酶类与辅酶类药品：蛋白水解酶类、凝血酶及抗栓酶，辅酶Q10等。;激素类及神经递质类药品：人生长激素释放抑制因子，人胰岛素，人生长激素

细胞因子类药品：人干扰素，人白细胞介素，集落刺激因子，促红细胞生成素

酶类及凝血因子类药品：单克隆抗体、疫苗、基因治疗药品、白介素、生长因子、内啡肽、反义药品、人生长激素、促红细胞生成素、肿瘤坏死因子等。;多肽和蛋白质物化性质;2.离子结合

蛋白质存在两性，其表面带有一定量电荷，可与阴离子或阳离子结合。

很多离子与蛋白质形成不溶性盐，可作为蛋白质沉淀剂。;多肽和蛋白质物化性质;4.变性

天然蛋白质严密结构在一些物理或化学原因作用下，其特定空间结构被破坏，从而造成理化性质改变和生物学活性丧失，如酶失去催化活力，激素丧失活性，称之为蛋白质变性作用(denaturation)。

变性蛋白质和天然蛋白质最显著区分是溶解度降低

变性并非是不可逆改变，当变性程度较轻时，如去除变性原因，有蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来构象及功效，变性可逆改变称为复性。;;3.2多肽和蛋白质药品生产方法;加拿大SembioSys生物工程企业利用北美洲普遍栽培高产油料作物——红花作为转基因植物“平台”，成功生产出“红花子起源人胰岛素”，

该胰岛素顺利经过动物试验与Ⅰ～Ⅱ期临床试验，其药代动力学与药效学试验结果与美国礼来利用大肠杆菌表述胰岛素基因生产重组DNA人胰岛素基本一样。

理论上，每公顷红花田可生产出1千克人胰岛素原料药。;加拿大渥太华大学生物技术研究中心科研人员也利用另两种高产作物——烟草和水稻植株生产出了一个名为“胰岛素样生长因子”(ILGF)新型降血糖药品。

据称，ILGF降糖效果甚至优于常规口服降糖药。

假如ILGF能经过临床试验并成功上市，或将成为前景可期国际医药市场畅销产品。;蛋白质、多肽提取分离惯用方法：

沉淀法（盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀、结晶等）

超滤法

膜分离法

离心分离法

凝胶过滤法

离子交换层析

疏水相互作用色谱

亲和层析等;基因工程药品分离与纯化流程;3.3.1反相高效液相色谱;3.3.1反相高效液相色谱;3.3.1反相高效液相色谱;③在水溶液中，疏水性基团避开水而亲合其它疏水性基团，即溶质分子非极性部分在水中倾向于与水接触面减小，促进了其与填料（疏水性配基）亲合。

④不一样蛋白质在相同流动相中因为疏水基团数量、种类以及表面分布情况不一样，与填料亲协力也不一样，从而得到分离。

结果：疏水性强蛋白质亲协力大，出峰迟；

疏水性小蛋白质就容易被洗脱。;色谱条件;③温度：常温;⑤洗脱方式：梯度洗脱——逐步增加洗脱强度。;30μm;应用;3.3.2疏水相互作用色谱;在HIC中：固定相表面有疏水性基团，（如-CH2，-CH3，-ph等）。

蛋白质分子是一个外部有亲水层包围，内部有疏水核含有四级结构复杂体系。

蛋白质表面亲水性很强，但也有一些疏水性基团，同时团状蛋白质还存在疏水基团较多裂隙。;分离原理;配基和蛋白质分子之间吸附推进力和样品组分洗脱机理（即：溶质在色谱中保留行为）：;结论;填料;色谱条件;1、流动相组成;2、流动相pH值：普通地pH4～8；常选pH7左右。;疏水作用色谱应用;比如：基因重组人干扰素r是一个基因工程产品，其粗品是7mol/L盐酸胍溶液。

干扰素在盐酸胍溶液中处于可逆性失活状态。因盐浓度太高无法直接上其它柱，除去盐酸胍后干扰素又轻易析出来。

若使用疏水作用色谱柱，将此样品直接进样，既脱除了盐酸胍，又到达了复性效果。而且一步分离后，干扰素纯度可到达90%。;疏水作用色谱与反相色谱区分;两色谱中洗脱液主要成份不一样（正是上面差异引发）;3.3.3体积排阻色谱;1、原理

凝胶过滤色谱(GelFiltration

ChromatographyGFC)又