感受态的制备质粒的转化和筛选专家讲座.pptxVIP

试验五

感受态制备、

质粒转化和筛选-10-30感受态的制备质粒的转化和筛选第1页

试验安排感受态制备质粒转化第二天，观察结果质粒酶切--电泳检测上次试验产物（质粒）感受态的制备质粒的转化和筛选第2页

酶切电泳点样安排电泳上样：1、全部同学各自酶切产物（10-20μl）2、每排点样孔需有两种质粒：pUC119、pUC119-U63、同一人“酶切前”与“酶切后”相邻点样感受态的制备质粒的转化和筛选第3页

试验步骤加1.5ml培养物于EP管，4000rpm×10min加入冰凉CaCl2溶液300μl，重悬菌体沉淀中加入冰凉CaCl2溶液120μl，重悬菌体感受态制备冰浴15-30min，4000rpm×10min搜集沉淀，去上清搜集沉淀，去上清（去掉培养基）感受态的制备质粒的转化和筛选第4页

试验步骤每管感受态中加质粒5μl，混匀42℃，热激90秒，勿摇动每管加LB500μl，37℃摇床，复苏30-40min铺200μl菌液到LB琼脂平板，涂匀转化冰上静置20-30min感受态的制备质粒的转化和筛选第5页

怎样设计试验参考体系（对照组）？感受态的制备质粒的转化和筛选第6页

筛选试验步骤LB培养基（X-gal,IPTG,Amp）LB培养基感受态+质粒（pUC119-U6orpUC119）感受态（无质粒）pUC119-U6pUC119对照