PCR产物电泳时间司法鉴定的奥秘.pdfVIP

PCR产物的电泳检测时间

一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带

型不规则甚致消。

假阴性，不出现扩增条带

PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与

特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应

针对上述环节进行分析研究。

模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂,

③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白,

④在提取制备模板时丢过多，或吸入酚。⑤模板核酸变

性不彻底。在酶前引物质量好时，不出现扩增带，极有可能

是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要

配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意

更改。

酶活：需更换新酎，或新旧两种酶同时使用,以分析是否

因酶的活性丧或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘

加Taq酶或澳乙锭。

引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，

是PCR败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有

些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一

条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个

好的引物合成单位。②引物的浓度