flagtag蛋白质的纯化及其鉴定方法.docx

FLAG-tag蛋白质的纯化及其鉴定

摘要

本文利用一条可被特异性识别的短肽（FLAG）作为蛋白质的标签与单纯蛋白质进行融合，通过亲和层析法对融合蛋白质进行第一步纯化，得到的融合蛋白质用肠激酶切除FLAG短肽后再通过分子筛层析对蛋白质进行第二步纯化，并分析各步纯化方法对蛋白质纯度的影响及其纯化后的质量检测。实验结果表明，加有蛋白质标签FLAG短肽的融合蛋白质，在亲和层析后得到的蛋白质纯度较高，高效液相色谱对其进行纯度检测可达91.8%，再通过第二步分子筛纯化后就可以得到更高纯度的目的分子量的蛋白质，高效液相色谱对其进行纯度检测可达100%，最终得到的蛋白质进行内毒素检测结果为0.087E