蛋白质工程与优化策略.pptVIP

蛋白质的改造;对蛋白质分子的改造主要涉及2个方面：

蛋白质分子的理性改造

蛋白质分子的非理性改造

非理性改造+筛选=定向进化;蛋白质的理性改造;基于DpnI的快速定点突变办法;盒式突变：

利用目标基因序列中合适的限制酶切位点，插入各种合适的突变DNA片段，用以取代目标基因中特定DNA片段。;将2个或各种不一样的模块连接成一种大分子，起连接作用的氨基酸片断为融合蛋白接头（linker）。

如：(GGGGS)3;Intein是一种自我拼接的蛋白质元件，类似于基因组中的内含子intron在RNA的剪接中所起的主要作用。Intein犹如一种插入前体蛋白的肽段，进行自我切除，并用一种肽键将两端的蛋白（extein）连接起来。;通过变化裂解条件以及对内含肽进行合适修饰，能够生物合成C端带有硫酯键或N端带有半胱氨酸的蛋白质分子。两种蛋白混合后，硫酯键和半胱氨酸发生自发连接反应，形成肽键，从而将两种蛋白连接起来。;全新蛋白质设计;蛋白质的定向进化;;理论上，蛋白质分子蕴藏着很大的进化潜力，很多功效有待于开发，这是酶的体外定向进化的基本先决条件。

体外定向进化技术极大地拓展了蛋白质工程学的研究和应用范围，尤其是能够处理合理设计所不能处理的问题，为蛋白质分子的结构与功效研究开辟了崭新的路径，并且在工业、农业和医药等领域逐渐显示其生命力。;定向进化=非理性改造+筛