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哺乳动物细胞传代培养作业指引

1.目的与适用范围

本作业指引旨在规范哺乳动物细胞传代培养的标准操作流程，确保实验人员在细胞培养过程中维持细胞的高活性、纯度及遗传稳定性。传代培养是细胞生物学实验及生物制药生产中的核心环节，其操作质量直接影响后续实验数据的可靠性及药物产品的安全性。本文档详细规定了从环境准备、试剂耗材准备、细胞形态观察到具体传代操作、冻存及复苏相关的各项技术细节与质量控制要求。

本指引适用于实验室所有从事哺乳动物细胞（包括但不限于CHO-K1、HEK293、Vero、Hela等贴壁及悬浮细胞系）培养工作的技术人员、研究人员及相关质量管理人员。所有涉及细胞操作的人员必须经过严格的技术培训及考核，合格后方可按照本指引独立进行操作。

2.术语与定义

为了确保文档内容的准确理解与执行，特对以下关键术语进行定义：

原代培养：直接从生物体组织（如胚胎、成体组织或肿瘤组织）分离获得的细胞在体外进行的首次培养。

传代培养：当原代培养或继代培养的细胞生长达到一定密度，接触抑制或营养耗尽时，将其从原培养容器中分离，按一定比例稀释后接种到新的培养容器中进行的培养过程，也称为继代培养。

汇合度：指贴壁细胞在培养容器底面积上覆盖的百分比，是判断细胞是否需要传代及接种密度的重要指标。

细胞代次：细胞从原代培养开始，经历的分离和再培养的次数次数。准确记录代次对于追踪细胞衰老、遗传变异至关重要。

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