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P-糖蛋白活性实验测定方法

P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）是一种广泛存在于生物体内的ATP结合盒（ATP-bindingcassette,ABC）转运蛋白，最早在多药耐药的肿瘤细胞中被发现。它能够利用水解ATP释放的能量，将多种结构和功能不同的底物泵出细胞外，从而降低细胞内底物浓度，参与药物代谢、内源性物质转运以及多药耐药等多种生理病理过程。准确测定P-gp的活性，对于阐明其生理功能、筛选P-gp抑制剂或诱导剂、评估药物相互作用以及研发新型抗肿瘤药物等方面具有重要意义。目前，P-糖蛋白活性实验测定方法多种多样，根据实验体系的不同，可大致分为细胞水平测定法、膜囊泡水平测定法、纯化蛋白水平测定法以及体内测定法四大类，每类方法都有其独特的原理、操作流程、优势与局限性。

一、细胞水平测定法

细胞水平测定法是基于完整细胞模型来评估P-gp活性的方法，这类方法能够较好地模拟体内生理环境，反映P-gp在活细胞中的实际功能状态。

（一）底物积累实验

底物积累实验是通过检测细胞内P-gp底物的积累量变化来反映P-gp活性的方法。其基本原理是：P-gp能够将底物泵出细胞外，当P-gp活性受到抑制时，细胞内底物的积累量会增加；反之，当P-gp活性被诱导增强时，细胞内底物的积累量则会减少。

常用的P-gp底物包括罗丹明123（Rhodamine123,R123）、钙黄绿素-