乙基紫分光光度法测定三磷酸胞苷二钠.docVIP

【标题】乙基紫分光光度法测定三磷酸胞苷二钠 【作者】张 佳 杰 【关键词】乙基紫??三磷酸胞苷二钠??紫外分光光度法 【指导老师】王 祥 洪 【专业】化学 【正文】1前言三磷酸胞苷二钠（Sodium Cytidine Triphosphate,CTP?）[1]?，这里缩写为 CTP。已被中国药典2005版二部[1]?收录。分子式：C9H14N3Na2O14P34，分子量：527.14.?三磷酸胞苷二钠的物理性质：三磷酸胞苷二钠是白色冻干块状物或粉末，有吸湿性，在水中易溶。其结构式：图1三磷酸胞苷二钠的结构式Fig.1?? The structure of Sodium Cytidine Triphosphate。三磷酸胞苷二钠是存在人体内的核苷酸类物质，是生命活动不可缺少的物质，在机体的正常代谢中起着重要的作用，它是核苷酸衍生物，也是核酸的重要组成部分，可以提高心肌细胞生物膜性结构的稳定性和重建能力。该药为神经系统用药，在机体中可以促进神经细胞内磷脂、核酸和蛋白质的合成，提高神经细胞抗损伤能力。在充血性心力衰竭中可能对改善心肌细胞的稳定性，增加心肌收缩力有益。三磷酸胞苷二钠对充血性心力衰竭的血液动力学效果为左心室充盈压，左心室容量和肺毛细血管楔入压全部下降的同时，而使心排出量增加；为治疗充血性心力衰竭的安全有效的方法[2]。三磷酸胞苷二钠[2]为辅酶类药，是核苷酸衍生物，在机体内参与磷脂类及核酸的合成和代谢，是脑磷脂合成与核酸代谢的中间产物和能量来源。近年研究用于脑震荡及后遗症[3]、脑出血后遗症、植物性神经紊乱、神经官能症以及心功能不全、进行性心肌萎缩、肝炎等疾病的辅助治疗[4]，主要有片剂和针剂供临床使用。目前国内外对三磷酸胞苷二钠的测定研究不多。主要有高效液相色谱法[5-10]，高效毛细血管电泳法，醋纤膜电泳双波长扫描法。其中许小春，卢兆新,黄子健采用高效液相色谱法[7],采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以0.1mol/L磷酸盐缓冲液为流动相检测波长为280nm,柱温有400C。测定有关物质含量。但是该方法有不少的局限性如色谱柱价格昂贵，流动相用量大?，样品用量也大。李大平和崔凤云[10]利用琼脂糖凝胶检测三磷酸胞苷二钠含量，该方法快速，操作简单，检测成本底。杨丽莉,赵陆华[11],毛细管气相色谱法同时测定三磷酸胞苷二钠５种有机溶剂残留量，方法简单快速。李耀曾，马贺民[12]采用醋纤膜电泳双波长扫描法测定CTP的含量。该方法简便，快速，线性较好电泳图谱显示CTP与胞苷二磷酸分离良好,含量测定的重现性好,回收率为98.25%,RSD为0.71%.本文采用乙基紫作显色剂,建立了测定三磷酸胞苷二钠的新方法。本文还对该体系的吸收光谱特征、适宜的反应条件、缔合比及干扰物的影响进行了研究。表明该法具有较高的灵敏度和选择性，方法简便，用于三磷酸胞苷二钠的测定，结果满意。该测定方法对分析化学、药学、临床医学等领域都将产生积极的影响，对医药品生产厂家及药检部门均具有广泛应用价值。2实验部分2.1主要试剂与仪器三磷酸胞苷二钠对照品（中国药品生物制品检定所）标准溶液：10μg?mL-1，常温保存；乙基紫(Ethyl Violet，EV Chroma公司进口分装)，2.5×10ˉ4 mol?L-1水溶液。BR缓冲溶液：用0.04mol?L-1 H3PO4，H3BO3和CH3COOH与0.2mol?L-1 NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH值的缓冲溶液，并用酸度计校核其pH值。以上药品均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。日立UV-3010型紫外可见-近红外分光光度计；HI9204型便携式酸度计（北京哈纳科仪科技有限公司）。2.2试验方法在10 mL比色管中，依次加入2mLpH6.3的BR的缓冲溶液、乙基紫染料(2.5×10-4mol?L-1)溶液1.0mL和一定量三磷酸胞苷二钠溶液(10μg?mL-1)，摇匀，放置10 min后，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，15 min后，在最大显色波长处以试剂空白为参比，测定吸光度。其中含有三磷酸胞苷二钠者记为A，试剂空白记为A0，计算ΔA?= A- A0?。3结果与讨论3.1吸收光谱图乙基紫－三磷酸胞苷二钠反应体系的吸收光谱如图2（a和b）所示.?以水作参比,由图1a可见，夜蓝的最大吸收波长位于594nm，以试剂为参比时，乙基紫－三磷酸胞苷二钠反应体系在波长为594nm处出现较大的波峰。当三磷酸胞苷二钠与乙基紫反应后，乙基紫产生增色反应，吸光度降低，最大褪色波长仍位于594 nm。从图2b可以看出，在594 nm处，其?A均与CTP的浓度成正比，因此可在此波长处显色分光光度处显色光光度法测定三磷酸胞苷二钠。3.2酸度