【毕业论文】三种萝卜SOD、PPO、POD活性研究.docVIP

【标题】?三种萝卜SOD、PPO、POD活性研究 【作者】刘光平 【关键词】?萝卜??酶活性??超氧化物歧化酶??过氧化物酶??多酚氧化酶 【指导老师】何士敏 【专业】生物 【正文】1??引言?萝卜（Raphanas sativas L.）是十字花科一年生植物，其为日常食用的蔬菜,现代研究证明萝卜富含维生素C、钙、铁、磷、粗纤维素、木质素、胆碱、组织氨基酸、碘、溴、葡萄糖、淀粉酶、钾、锰、硼、芥子油等多种成分,具有很高的营养价值.此外萝卜亦有很高的药用价值,有清热解毒、生津止咳、顺气化痰消谷的功效,可以用于治疗多种疾病。红心萝卜，又名胭脂萝卜，以心皮全红、质地脆嫩著名。主产重庆市涪陵区，邻近市县及四川、贵州等省也有栽培。1979年全国蔬菜品种资源调查确定为涪陵特产。以红心萝卜肉质根为原料提取的天然红色素，无人工合成色素之副作用，可作食品、饮料和化妆品的着色剂和添加剂，市场前景看好。近年，红心萝卜色素提取技术的研究取得突破，解决了脱糖、脱胶和去萝卜味的问题，产品色价大大超过国家规定的出口色素价位，已有企业进入规模化生产[1]。但对红心、白条、白圆三种萝卜的比较研究甚少。涪陵盛产红心萝卜，研究涪陵地区红心、白条、白圆萝卜超氧化物歧化酶?、多酚氧化酶、过氧化氢酶酶活性对农业生产及医药日用化工、食品及生化界具有指导意义，更是对地区的发展起推动作用。过氧化物酶和多酚氧化酶同属于氧化酶体系,主要参与酚类氧化为醌及木质素前体的聚合作用,其活性与抗性有密切关系,?超氧化物歧化酶和过氧化氢酶又是植物体内重要的活性氧防御酶。植物在正常状态下,体内活性氧的产生与消除处于平衡状态,因此防御酶体系也相对稳定。本文对涪陵地区红心、白条、白圆萝卜的超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、过氧化氢酶酶活性进行了对比研究。2 材料与方法2.1材料萝卜均采自重庆市涪陵地区集贸市场，品种为该地区最常见的红心、白条、白圆三种萝卜，所测定部位为其根茎部分。2.1.1仪器与设备台式离心机（型号：TGL—16C）、紫外可见分光光度计（型号：UT—1800）、电子分析天平（型号：AR2140）、磁力搅拌器（型号：79—1）、微量取样器（型号：W—167）、万能电炉(型号：DL—1)、冰箱(型号：BCD—218)?、光照培养室(生命科学系实验楼四楼)。2.2??方法2.2.1?超氧化物歧化酶酶活性的测定2.2.1.1原理超氧化物歧化酶（SOD）广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。超氧阴离子( O2-?)为代谢产物，它在体内过量会引起一些相关疾病。由于SOD能专一消除超氧阴离子（O2-）而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，并引起了国内外医药界、生物界、和食品界的极大关注。SOD的活力测定方法很多，其中化学方法应用最普通。在一般情况下，SOD酶活性测定只能应用间接活性测定法。用NBT法测定多次结果不正确（但张文军等提到用NBT法较好[8]，可能由于客观条件所致），所以本试验采用邻苯三酚自氧化方法，邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出超氧阴离子（O2-），生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是生成的中间物不断氧化的结果。这里测定是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段，中间物的积累在滞留30—45s后与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化超氧阴离子(O2-)与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间物的积累，因此通过计算即可求出SOD的酶活性。2.2.1.2试剂PH 8.3?(50mmol/l) Tris—Hcl[称取Tris(三羟甲基—氨基甲烷) 0.61g，EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠)0.037g,用蒸水溶解至80ml左右。用Hcl调节PH值为8.3（用PH计校正），最后定容?至100ml。]?10mmol/l Hcl?[配制方法：取1ml 36% Hcl?(12 mol/l)，再加119ml蒸馏水，摇匀即可。]??50mmol/l邻苯三酚[称取邻苯三酚0.63g，用10mmol/lHcl溶液溶解，定容至100ml，避光保存。]2.1.1.3方法???第一步：SOD粗酶液的制备：称取三种萝卜各2g，先加3ml pH 8.3的Tris-Hcl缓冲液于研钵中冰浴研磨成匀浆，再加入3mlpH 8.3的Tris-Hcl缓冲液（研磨湿布加入过多的缓冲液便于充分研磨），倾出上清液与离心管，以8000r/min离心10min,收集上清液，即为粗酶液（保存在