MC3T3E1细胞分化过程中Cbfα1及相关基因的表达.pdfVIP

118 ·论著· MC3T3E1细胞分化过程中Cbfal 及相关基因的表达 刘敏周后德 何玉玲谢辉廖二元 摘要：目的研究在小鼠前成骨细胞MC3T3E1诱导成骨过程中，总cb如1、cb血1两种亚型Cbhl／P56、 Cbfal／P57及碱性磷酸酶、I型胶原、骨钙素、骨涎蛋白和骨桥素在前成骨细胞成熟过程中的变化。明 确Cbhl、Cbhl亚型及相关基因表达与成骨细胞分化的关系，探求与成骨细胞成熟更密切相关的 Cbhl亚型，为进一步的Cbhl亚型研究提供基础。方法MC3T3E1细胞在含肛甘油磷酸钠，抗坏血酸 的培养基中培养22d，在细胞培养的不同时间(0，4，10，14，18，22d)，用a．磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性；VanGieSon苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原；茜素红染色观察矿化结节形成；半 定量RT-PCR检测总cb纠mRNA及Cbhl／P56、Cbfal／P57mRNA和I型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥素 mRNA的表达；用Western．blot检测cb缸1蛋白的表达。结果MC3T3E1细胞在B．甘油磷酸钠存在的情 况下，培养第18d开始出现矿化，第22dI型胶原染色及茜素红染色均观察到明显矿化结节形成。 随MC3T3E1细胞的分化，cb缸lmRNA的表达量逐渐增高，Cbhl／P57mRNA在第18和22d的表达量明 显增高，Cbhl／P56mRNA无变化。Cbhl蛋白随MC3T3EI细胞的分化，表达量逐渐增高。同样，随 MC3T3E1细胞分化，I型胶原、骨钙素、骨桥素和骨涎蛋白mRNA的表达量逐渐增高。ALP活性0—10 d逐渐增高，10d后逐渐下降。结论在MC3T3EI细胞的分化过程中I型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨 桥素mRNA随MC3T3EI细胞的分化表达逐渐增高。CbhlmRNA及Cbhl蛋白的表达随细胞的分化逐 渐增高，与其他成骨特异性基因的变化趋势一致，并以Cbfal／P57mRNA亚型为主。Cbfal／P57亚型的 表达与成骨分化的关系更密切，在进一步的与成骨细胞分化有关的Cbfal亚型研究应以Cbfal／P57亚 型为主。 关键词：MC3T3E1；细胞；Cbfal；细胞分化；成骨细胞特异性基因 ofcore factor I(Cbml)andrelated inMC3T3EIcelllinedifferentiation Expressionbindingalpha genes LIUMin，ZHOUHoude，HEYulineta1．Institute Second ofEndocrinologyMetabolism，TheHospital， Xiangya Central 410011．China sD以危University．Changsha Tounderstandthe of Abstract：0bjective I， geneexpressionpmfilecb如l，Cbhl／P56，Cbhl／P57，collagen inMC3T3E1celldifferentiation．Methods osteocalcin，osteopontin，bonesialoprotein，alkalinephosphatase MC3T3E1cellswereculturedfor22 of I， days，the Cb缸l，Cb缸l／P56，Cbfal／P57，collagen expressions andbone