Robo1 在视网膜_脉络膜血管内皮细胞中的作用研究.docVIP

  Robo1 在视网膜/脉络膜血管内皮细胞中的 作用研究# 5 10 15 20 25 30 35 40  摘要：目的：探讨神经导向因子 Robo1 在视网膜/脉络膜血管内皮细胞（RF/6A ）中的作用。 方法：通过 siRNA 干扰技术降低 Robo1 基因在 RF/6A 细胞中的表达，用 RT-PCR 检测 mRNA 表达变化,用 Western Blot 检测蛋白表达变化。采用 MTT，Boyden 小室，免疫荧光，流式细 胞仪对细胞的增殖，迁移，伸展，细胞周期进行检测。用 Matrigel 对 RF/6A 血管形成进行 检测。结果：siRNA 干扰技术在 mRNA 水平以及蛋白水平均有效的沉默 Robo1 基因在细 胞中的表达。Robo1 siRNA 干扰后 RF/6A 细胞的粘附、增殖、迁移均受到抑制，RF/6A 血 管形成明显受到抑制。结论： Robo1 siRNA 对 RF/6A 细胞的细胞增殖、迁移能力的抑制作 用以及管道形成能力明显。Robo1 基因为临床视网膜新生血管性疾病的治疗提供了新的靶 点。 关键词：小干扰 RNA；RF/6A；Robo1；增殖 The roles of Robo1 in the retinal/choroidal vascular endothelial cells Huang Lvzhen, Xu Yongsheng, Li Xiaoxin (Key Laboratory of Vision Loss and Restoration, Ministry of Education, Department of Ophthalmology, Peking University People’s Hospital, Beijing 100044) Abstract: Purpose: To evaluate the roles of Robo1 in the retinal/choroidal vascular endothelial cells (RF/6A).Methods: siRNA technology was used to knock down survivin expression and to study its effects on cells in vitro. Cell proliferation, migration, spreading, cycling, and apoptosis were assessed with the MTT assay, Boyden chamber assay, immunocytochemistry, and flow cytometry.Tube formation by RF/6A on Matrigel was also analyzed.Results:Robo1 siRNA knockdown inhibited cell proliferation, migration. Tube formation by RF/6A cells was also disturbed.Conclusions: Silencing the expression of Robo1 in RF/6A cells inhibited their proliferation, migration and tube formation. This study indicates that Robo1 may be a molecular target for new diagnostic and therapeutic strategies for neovascular retinopathy diseases. Keywords: siRNA; RF/6A; Robo1; neovascularization 0 引言 病理性脉络膜和视网膜新生血管是造成视力丧失的主要原因如早产儿视网膜病变、年龄 相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变等[1-2]。近年来，越来越多的研究发现，神经系统与血 管系统具有很多的相似点。有很多在神经系统中具有一定作用的因子被证实在血管生成系统 中也具有重要作用，其中就包括 Robo 家族。Robo 家族史一类与发育有关的保守的跨膜蛋 白家族，在神经系统的发育中发挥重要作用。1993 年，在对果蝇的研究中克隆了首个 Robo 基因即 Robo1 基因[3]。早期的 Robo1 蛋白的功能研究主要集中在神经系统的发育过程。近 年来越来越多的研究发现 Robo1 可能参与肿瘤组织的发生发展过程。Wang 等首次报道了 Robo1 在肿瘤血管形成中的重要作用，发现 Robo1 表达在肿瘤血管内皮细胞上，并通过体 内