Robo1 在视网膜色素上皮细胞中的作用研究.docVIP

  Robo1 在视网膜色素上皮细胞中的作用 研究# 5 10 15 20 25 30 35 40  摘要：目的：探讨神经导向因子 Robo1 在正常人眼视网膜及增生性糖尿病视网膜病变（PDR）、 增生性玻璃体视网膜病变（PVR）患者的增殖膜中的表达，同时探讨 Robo1 在视网膜色素 上皮细胞细胞（RPE ）中的作用。方法：取角膜移植后 24 小时内的正常成人眼球 3 例及玻 璃体视网膜手术中取出的 11 例 PDR 和 PVR 患者的增生膜，其中 6 例 PDR，5 例 PVR 行免 疫组化检测 Robo1 的表达及定位。通过 siRNA 干扰技术降低 Robo1 基因在 RPE 细胞中的 表达，用 RT-PCR 检测 mRNA 表达变化，用 Western Blot 检测蛋白表达变化。采用 MTT， Boyden 小室，免疫荧光，流式细胞仪对细胞的增殖，迁移，伸展，细胞周期变化进行检测。 结果：Robo1 表达于正常成人眼视网膜神经节细胞层、神经纤维层、内外丛状层和部分内核 层细胞。增殖膜中 Robo1 的表达阳性，在血管内皮细胞（CD31）、视网膜色素上皮细胞 （cytokeratin Pan）、胶质细胞（GFAP）均表达阳性。siRNA 干扰技术在 mRNA 水平以及 蛋白水平均有效的沉默 Robo1 基因在细胞中的表达。Robo1 siRNA 干扰后 RPE 细胞的粘 附、增殖、伸展、迁移均受到抑制。结论： Robo1 可表达于正常人眼。Robo1 siRNA 对 RPE 细胞的细胞增殖、伸展、迁移能力的抑制作用明显。Robo1 基因异常表达在 PDR、PVR 的 发生发展中起一定作用。 关键词：小干扰 RNA；视网膜色素上皮细胞；Robo1；增殖 The roles of Robo1 in the retinal epithelial cells Huang Lvzhen, Xu Yongsheng, Li Xiaoxin (Key Laboratory of Vision Loss and Restoration, Ministry of Education, Department of Ophthalmology, Peking University People’s Hospital, Beijing 100044) Abstract: Purpose: To evaluate the expression pattern of Robo1 in normal adult retina and in the pathologic membranes of proliferative retinopathy and proliferative diabetic retinopathy. We also detect the roles of Robo1 in the retinal epithelial cells (RPE).Methods: 3 normal adult eyeballs were got after corneal transplantation within 24 hours. Proliferative memebranes were obtained during vitrectomy from patients with 6 PDR and 5 PVR. siRNA technology was used to knock down Robo1 expression and to study its effects on cells in vitro. Cell proliferation, migration, spreading,cycling,were assessed with the MTT assay, Boyden chamber assay, immunocytochemistry, and flow cytometry. Results:Robo1 was expressed in retinal ganglion cell layer,nerve fiber layer,inner and outer plexiform layer and some nuclear layer cells.Immunohistochemistry showed that Robo1 expres-sion was detected in GFAP-labeled glial cells and cytokeratin-labeled RPE cells in proliferative membranes. Robo1 expres-sion was also de