不同浓度rhBMP-2对人胎盘间充质干细胞增殖及碱性磷酸酶表达的影响.docVIP

  不同浓度 rhBMP-2 对人胎盘间充质干细胞 增殖及碱性磷酸酶表达的影响# 宋扬，李彦，廖晓瑜* 5 10 15 20 25 （中山大学光华口腔医学院，广州 510080） 摘要：目的：探讨重组人骨形成蛋白 2（recombinant human bone morphogenetic protein-2， rhBMP-2）作用于人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells , HPD MSCs)的适宜浓度。方法：酶消化法获得 HPD MSCs，流式细胞仪检测 P3 代细胞表面标志， 诱导 P3 代细胞成骨和成脂向分化并鉴定。将 P3 代细胞分成对照组和实验组（A-D 组）。 rhBMP-2 分别以浓度为 50(A 组)、100 (B 组)、150 (C 组)、200 (D 组) ng/ml 作用于 HPD MSCs。 在第 4d、8d、12d、16d 用 CCK-8 实验记录细胞增殖， ALP 定量检测法检测酶的表达。结 果：酶消化法获得呈成纤维细胞样的 HPD MSCs。细胞表达 CD29、CD44、CD105，不表达 CD34、 CD45、CD 106、HLA-DR。细胞成骨诱导 21d 后 Von Kossa 染色和 ALP 检测阳性； 成脂诱导 28d 油红 O 染色阳性。在所有时间点下，A、B、C 组 CCK-8 实验 A450 与对照组 相比，差异无统计学意义，P＞0.05；在所有时间点 D 组 A450 均低于其它组，P0.05；A-D 组 ALP 检测 A520 在所有时间点均高于对照组，P0.01；B 组和 C 组 A520 在第 8d、12d、 16d 高于其它组，P0.01；B 组和 C 组 A520 在所有时间点差异无统计学意义，P＞0.05。结 论： rhBMP-2 对人胎盘间充质干细胞的适用浓度是 100 ng/ml -150ng/ml。 关键词：细胞培养；胎盘；间充质干细胞；增殖；碱性磷酸酶 中图分类号：R783 The effects of different doses of recombinant human bone morphogenetic protein-2 on proliferation and Alkaline Phosphataes in human placenta-derived mesenchymal stem cells song yang1, LI Yan1, Liao Xiaoyu2 (1. Guanghua school of stomatology, Sun Yat-sen unversity,guangzhou 510080; 2. Guanghua school of stomatology,Sun Yat-sen University) 30 Abstract: Objective To investigate the optimal concentration for the usage of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) on human placenta-derived mesenchymal stem cells (HPD MSCs). Methods The HPD MSCs were obtained by enzyme digestion. Cell surface markers of the third passage HPD MSCs were assessed by flow cytometer , and the adipogenic and osteogenic differentiation capacity was tested. The third passage of HPD MSCs were divided 35 into control group and experimental groups(Group A-D). Treated the cells with different doses of rhBMP-2（50、100、150、200 ng/ml）in Group A-D . The proliferation was assessed by the CCK-8 detection and ALP activity was measured by quantitative analysis on the 4th, 8th, 12th, 16th day . Results The HPD MSCs obtained by en