园艺专业毕业论文--大白菜核基因雄性不育抑制差减文库构建.docVIP

摘 要 大白菜为两性花异花传粉蔬菜作物，杂种优势十分显著。由于其花器官小，单花结籽少，而单位面积的播种量又较大，常规的杂交制种必然存在去雄费工、费力、成本高等缺点。本课题组率先育成100%不育株率的雄性不育材料，但是，对其遗传规律的认识还停留在形态和细胞水平，产生雄性不育的分子基理还不清楚。本部分试验以，PCR 技术分析基因时空表达模式。为进一步克隆相关基因、揭示分子机理。 前言 白菜（Brassica campestris L. ssp.pekinensis Makino）属十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种，起源于中国，栽培历史悠久，资源丰富，类型多样，是我国重要蔬菜之一，在各类蔬菜中栽培面积最大。在国际上，大白菜也从我国向世界各国传播，其中日本、朝鲜及东南亚一带栽培较多，历史较长。近年来，欧美等国家都已引入并有不同程度的发展。白菜产量高、耐贮藏、营养丰富。不但适合炒、煮、拌、腌，而且还可生食越来越受到人们的喜爱。 大白菜为典型的异花授粉作物，品种或自交系间一代杂种存在明显的杂种优势，国内外白菜的优良品种已绝大部分为一代杂种。一代杂种种子的生产是杂种优势利用的关键步骤之一。自“六五”开展全国攻关以来，在育种技术手段和方法上获得了较大的提高，相继育成了一大批优质、抗病，丰产的一代杂种并在生产上推广利用。白菜一代杂种的种子生产常用方法是利用自交不亲和系和雄性不育系。 七十年代开始，为了克服自交不亲和系的缺点，我国选育出多个大白菜隐性核不育系。大白菜隐性核不育两用系的利用，解决了利用自交不亲和系制种亲本繁殖难和生活力下降的难题，但是在生产杂种时拔除母本行50%的可育株，增加了育苗成本，此外，如可育株拔除不彻底，使杂交率降低，种子质量得不到保证。因而利用细胞质雄性不育系制种是生产一代杂种种子最经济，最有效的途径之一，因此受到世界各国育种者的重视。 1.植物雄性不育 1.1植物雄性不育研究简史 植物雄性不育是指植株不能产生正常的花药、花粉或雄配子，而其雌性生殖系统发育和营养生长完全正常的一种生物学现象，其广泛存在于开花植物中。早在 1863 年Kolreuter 就观察到雄性不育现象，一个世纪后 Coleman 首先引入“植物雄性不育”的概念。目前，已在 43 科162属320种的617个品种或种间杂种中发现雄性不育现象[2]。 1.2 植物雄性不育的类型及遗传机制 植物雄性不育有许多不同的表现，常见的有：（1）雄性器官萎缩，畸形或消失；（2）不能形成正常的小孢子发生组织；（3）小孢子发育异常，形成不完善的、不能存活的畸形或败育的花粉；（4）花粉不能成熟或无萌发能力；（5）能形成有活力的花粉，但花药不开裂。植物不能产生功能花药、花粉或雄配子的现象称雄性不育[3]。 植物雄性不育是细胞核基因或细胞质基因或两者互作的结果，雄性不育的表现型是不育基因表达的结果，而基因型则是不育性的遗传本质和遗传模式。导致雄性不育的因素是多种多样的，因此，在分类上也因标准不同出现不同的分类系统。Sears 根据遗传机制的差异，将植物雄性不育可分为细胞核雄性不育，细胞质雄性不育和核质互作雄性不育 3 种类型，称之为“三型学说”；Edwardson(1956)把“三型学说”中的质不育和质核互作不育并为一类，从而把植物雄性不育分为核不育型和核质互作不育型（常简称为细胞质雄性不育）简称为“二型学说”。Gabelman（1956）根据花粉、雄蕊的形态将雄性不育划分为花粉型、雄蕊型和功能型 3 类；Heslop-Harrison(1971)按世代交替把雄性不育划分为孢子体不育和配子体不育2种类型。Kaul在总结前人研究的基础上将植物雄性不育归纳为非遗传型和可遗传型 2 大类。 随着与细胞质雄性不育基因特异作用的核基因的发现，已经证实，细胞质雄性不育仅仅是核质互作雄性不育的一个短暂的过程，不能被认为一种雄性不育类型，因此，从不育性的基因型组成角度上划分，植物雄性不育有核质互作雄性不育和细胞核雄性不育2种类型，细胞核雄性不育简称核不育（Genie Male sterility,GMS或Nuclear Male Sterility,NMS），核质互作雄性不育简称细胞质不育(Cytoplasmic Male Sterility,CMS)。 1） 细胞核雄性不育 细胞核雄性不育由核基因控制，其作用不受细胞质类型的影响，因此，这种类型的雄性不育性的遗传和表达完全遵循孟德尔遗传规律。根据不育基因与对应的可育基因之间的显隐关系，又可分为隐性核不育和显性核不育两类。隐性核不育的遗传由一对隐性基因（msms）控制。而显性核不育的遗传，通过遗传资料分析并不是单单由一对基因控制，至少由两对或两对以上基因控制。 2） 核质互作雄性不育 这种类型的雄性不育性由不育细胞质因子（S）和不育细胞核基因（fr