蛋白质工程技术与新型生物催化剂设计.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 Pharmaceutical Biotechnology 　2004 ,11 ( 1) :1～6 1 ·专家论坛 · 蛋白质工程技术与新型生物催化剂设计 吴梧桐 ( 中国药科大学生命科学与技术学院 ,江苏 南京 2 10009) 摘 　要 　生物催化剂的分子设计研究是发展新型生物催化剂的重要手段 。蛋白质工程技术的应用为其发 展提供了有效的技术平台。定点突变技术 、DNA 改组与体外定向进化技术等已在创造新型生物催化剂 、改造天 然生物催化剂的结构与功能方面呈现出良好发展前景 。本文对有关技术的原理与应用及其已取得的主要研究 成果做了简要介绍与讨论 。 关键词 　新型生物催化剂 ;蛋白质工程 ;定点突变 ;DNA 改组 ;定向进化 中图分类号 :Q816 ,Q55 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :100589 15 (2004) 0 1000 106 　　生物催化剂具有高效 、特异的催化活力 ,使其在工业上 等不耐受 ,药用治疗酶也存在着在体内半衰期短 、生物利用 具有巨大应用潜力 ,在临床上作为治疗剂与诊断试剂 ,生物 度低 、易产生免疫反应等缺点 ,所以在实际应用中有时就难 催化剂也具有良好的发展前景 。而天然生物催化剂在实际 于采用这类脆弱的生物催化剂 。另外 ,依据现有的技术水 应用时尚面临着诸多限制 :其一是酶的实际应用活性不高 , 平尚难保证大规模制造价廉物美的酶制剂 。因此酶的实际 ( ) ( 许多酶 虽然有满意 的转化数 Kcat 与 比活常数 Kcat/ 应用活性 ,酶的稳定性和可生产性是理想生物催化剂的研 Km) ,但在应用中仍受到底物 、产物和生物转化反应的多种 究关键 。一个理想的生物转化工艺设计常常包括酶的发酵 因素影响 。尤其是多数酶分子量很大 ,却仅有一个活性中 生产 、酶的分离 、纯化 、酶的固定化 、生物转化过程和产物回 心 ,因此单位质量生物催化剂的催化效率有时就显得不高 ; 收等多项技术过程[ 1 ] ( 图 1) 。 其二是工业用酶一般对环境因素如温度 、p H 和重金属离子 ( 图 1 　影响理想生物转化工艺设计的相关因素 通过关键技术的研究 可以改进每个单元操作的效率 ,如高密度发酵能降低发酵容积和简化下游操作) ( ) ( 　　为了克服天然生物催化剂的固有缺点 ,人们急需发现 向进化技术 directed evolution 、DNA 改组技术 gene shuf ) ( 或创造新一代的生物催化剂 ; 蛋白质工程技术已成为新型 fling 、合理组合技术 Combinations of rational and combina ( ) 生物催化剂分子设计的有效手段 。定点突变技术 sitedi