小鼠不同电特性的心肌细胞Kir2. 1, SCN5a 和SCN1b 通道基因的表达 膜片钳结合单细胞RT-PCR 技术研究.pdfVIP

82 生理学报Acta Physiologica Sinica , February 25, 2012, 64(1): 82–86 实验技术 小鼠不同电特性的心肌细胞Kir2.1 、SCN5a和SCN1b通道基因 的表达: 膜片钳结合单细胞RT-PCR技术研究 骆红艳，梁华敏，胡新武，唐 明* 华中科技大学同济医学院基础医学院生理学系，武汉 430030 摘 要：本文旨在应用膜片钳技术结合单细胞逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)技 B (E10.5) 术研究小鼠胚胎心肌细胞的不同电生理学特点的分子生物学基础。应用胶原酶 消化分离得到小鼠胚胎早期 单个心肌 细胞，先用膜片钳技术记录单个胚胎心肌细胞的动作电位，随即应用玻璃微电极吸取该细胞内容物，进一步应用RT-PCR技 术检测该单个心肌细胞离子通道基因Kir2.1 、SCN5a和SCN1b的表达，以GAPDH为内参基因。全细胞电流钳技术记录到心室 肌样细胞、心房肌样细胞和起搏样细胞的动作电位。心室肌样细胞和心房肌样细胞动作电位的最大舒张期电位(maximum diastolic potential, MDP) 0 (maximum velocity of depolarization, V ) 较起搏样细胞更负， 期最大除极速度 max 更快；心室肌样细胞 动作电位的MDP相对心房肌样细胞更负。相对应的，心室肌样细胞的Kir2.1 、SCN5a、SCN1b三种基因表达均较强；心房肌 样细胞的SCN5a表达较强，而SCN1b和Kir2.1相对心室肌样细胞表达稍弱；而起搏样细胞的上述三种基因表达均很弱。不同 类型心肌细胞动作电位的基本特点与其基因表达密切相关，应用膜片钳技术结合单细胞RT-PCR技术可以敏锐检测到特定电 生理特点的分子生物学基础。 关键词：膜片钳技术；单细胞逆转录聚合酶链反应；电生理；分子生物学；胚胎心肌细胞 中图分类号：R33 Expression of Kir2.1, SCN5a and SCN1b channel genes in mouse cardiomyocytes with various electric properties: patch clamp combined with single cell RT-PCR study LUO Hong-Yan, LIANG Hua-Min, HU Xin-Wu, TANG Ming* Department of Physiology, Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China Abstract: This study is to explore a new method of investigating molecular basis for electrophysiological properties of early fetal car- diomyocytes. Single embryonic cardiomyocytes of mouse early developmental heart (E10.5) were obtained by a collagenase B diges- tion approach. After recording spontaneous action potential using whole cell patch clamp technique, the single cell was pic