胚胎植入前遗传学诊断技术的挑战.docVIP

胚胎植入前遗传学诊断技术的挑战 徐艳文 　　摘要:如何安全有效地获得胚胎的遗传物质，如何克服极低样本量对诊断的的准确性和有效性的影响，以及如何开发适用范围更广的诊断方法是植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)技术层面面临的主要挑战。多个随机对照前瞻性研究证实非整倍体筛查显著降低了高龄妇女的临床妊娠率和活产率，其原因可能是由于卵裂期胚胎的染色体不稳定性影响结果的准确性。通过极体活检进行非整倍体筛查的临床应用价值尚须进一步研究。 　　关键词:植入前遗传学诊断;胚胎活检;聚合酶链式反应;荧光原位杂交;多重置换扩增 　　Abstract:Three major challenges of preimplantationgenetic diagnosis(PGD)include improving the safe-ty of biopsy，overcoming the impact of extremely lowsample size on the diagnosis，and developing new di-agnostic methods with wider scope of application.Numbers of prospective randomized control studiesconfirmed aneuploidy screening significantly reducedthe clinical pregnancy rate and live birth rate in elderly women.The reason may be due to chromosomalinstability of cleavage-stage embryos，which may af-fect the accuracy of PGD diagnosis.The clinical val-ue of polar body biopsy for aneuploidy screeningneeds further study. 　　Keywords:preimplantation genetic diagnosis;embryo biopsy;PCR;FISH;MDA 　　植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)通过在配子或早期胚胎阶段对遗传病进行分子遗传学的诊断，选择没有疾病表型的胚胎移植入子宫，从而避免遗传病胎儿的妊娠。可以说PGD从妊娠的源头上实现优生。但在近20年的发展中，PGD走过了一条并不平坦的发展之路，人们对技术本身的认识及其临床应用也逐渐趋于客观和理性。 　　1 PGD的发展史 　　1990年英国Handyside等[1]报道世界首例对性连锁性疾病携带者进行胚胎性别筛选后的妊娠分娩。2年后，他们又报道了PGD在常染色体隐性遗传病纤维囊性变的成功应用[2]。随后，人们在多种遗传性疾病进行了PGD的尝试。 　　目前文献报道进行PGD的单基因性疾病多达80余种，但80%的PGD集中于10种疾病，如常染色体隐性遗传性疾病包括β-地中海贫血、纤维囊性变、脊肌萎缩症、镰刀型红细胞贫血，常染色体显性遗传性疾病包括亨廷顿病、强直性肌营养不良症和腓骨肌萎缩症，性连锁性疾病包括脆性X染色体综合征、进行性肌营养不良和血友病等[3]。对某些非疾病性的以及有遗传倾向的疾病如乳腺癌、卵巢癌的PGD更是突破了产前诊断的框框，赋予PGD新的生命力，也使PGD更具有其独特的应用价值。单基因性疾病PGD的主要诊断方法是通过单细胞PCR技术扩增致病基因。2006年来，也有选择与致病基因在染色体的位置上紧密连锁的STR标记鉴别胚胎是否遗传了有致病基因的染色体来进行诊断，该方法又被称为植入前遗传学单倍型分析(preimplantation genetic haplotyping，PGH)[4]。荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization，FISH)技术于1994年始用于胚胎性别的诊断[5]。1998年FISH开始应用于染色体平衡易位的PGD诊断。通过选择正常和平衡配子或胚胎，PGD可显著降低染色体易位导致的反复自然流产率[6]。这是产前诊断无法比拟的。同年，商业化供应的能同时诊断13，18，21，X和Y五条染色体的五色探针也开始用于PGD中进行高龄妇女卵子和胚胎的非整倍体筛选，使人们首次清楚地认识到人类胚胎中存在20%～60%的高比例的染色体嵌合型现象。 　　1998年以来，对高龄妇女、反复IVF种植失败以及反复自然流产的妇女的胚胎进行非整倍体筛选(preimplanta-tion genetic