噬菌体Legendre 的生物学特性及抗耐药结核潜力的初步研究.pdfVIP

第３４卷第９期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．９ ２０１２年５月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｍａｙ１５　２０１２ ８２１ 文章编号：１０００５４０４（２０１２）０９０８２１０６ 论著 噬菌体Ｌｅｇｅｎｄｒｅ的生物学特性及抗耐药结核潜力的初步研究 刘　平，邬亭亭，彭　丽，郭述良，罗永艾　　（４０００１６重庆，重庆医科大学附属第一医院呼吸科） 　　［摘要］　目的　研究噬菌体Ｌｅｇｅｎｄｒｅ的生物学特性并初步探索其用于抗耐药结核的潜力。方法　 双层平板法制备 Ｌｅｇｅｎｄｒｅ的噬菌斑，观察其特点，纯化噬菌体，电镜观察Ｌｅｇｅｎｄｒｅ形态；提取Ｌｅｇｅｎｄｒｅ基因组，限制性内切酶酶切分析确定 其核酸类型；以不同感染复数扩增Ｌｅｇｅｎｄｒｅ，找出最佳ＭＯＩ和最小ＭＯＩ；通过一步生长实验找出Ｌｅｇｅｎｄｒｅ潜伏期、裂解期 和裂解量；纯化Ｌｅｇｅｎｄｒｅ颗粒，免疫家兔，获得抗血清，通过中和反应实验测定Ｌｅｇｅｎｄｒｅ以及其他８种噬菌体和Ｌｅｇｅｎｄｒｅ 抗血清之间的吸附反应常数Ｋ值；采用单斑法测定Ｌｅｇｅｎｄｒｅ的宿主谱；检测Ｌｅｇｅｎｄｒｅ对紫外线、温度、氯仿、酒精、酸碱度 的耐受性。结果　 Ｌｅｇｅｎｄｒｅ的噬菌斑圆形透明，边界清楚，Ｌｅｇｅｎｄｒｅ头部呈多面体立体对称，直径平均为６５ｎｍ，尾长平均 －４ 为２１５ｎｍ；基因组核酸能被双链ＤＮＡ内切酶ＥｃｏＲ ，Ｈｉｎｄ 及ＢａｍＨ 切开，大小约６５ｋｂ；Ｌｅｇｅｎｄｒｅ最佳 ＭＯＩ为１０ ， Ⅰ Ⅲ Ⅰ －３ 最小ＭＯＩ为１０ ，Ｌｅｇｅｎｄｒｅ对耻垢分枝杆菌极度易感；Ｌｅｇｅｎｄｒｅ感染宿主菌的潜伏期为１８０ｍｉｎ，裂解期为１２０ｍｉｎ，裂解量 为１３；ＬｅｇｅｎｄｒｅＫ值为６９７，Ｌｅｇｅｎｄｒｅ抗血清对非对应噬菌体的中和活性有差异，对 ＤＮＡ 、Ｂｏ４、Ｃｌａｒｋ、Ｓｅｄｇｅ、Ｌｅｏ高，对 Ⅲ ＴＭ４、Ｄ２９中和活性较低；Ｌｅｇｅｎｄｒｅ能裂解耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株、多数临床耐药株；Ｌｅｇｅｎｄｒｅ对紫外线、温 度、氯仿、酒精、酸碱度均敏感。结论　 Ｌｅｇｅｎｄｒｅ属于长尾噬菌体科，双链 ＤＮＡ噬菌体，抗原性低，宿主谱广，具有抗耐药 结核潜力。 　　［关键词］　 Ｌｅｇｅｎｄｒｅ；耻垢分枝杆菌；结核分枝杆菌；生物学特性；耐药结核病 　　［中图法分类号］　Ｒ３７２；Ｒ３７３．９；Ｒ５２０．５　　 ［文献标志码］　Ａ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅＬｅｇｅｎｄｒｅａｎｄｉｔｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｉｎｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｃｏｎｔｒｏｌ ＬｉｕＰｉｎｇ，ＷｕＴｉｎｇｔｉｎｇ，ＰｅｎｇＬｉ，ＧｕｏＳｈｕｌｉａｎｇ，ＬｕｏＹｏｎｇａｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｉｓｅａｓｅｓ，ＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ， ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００１６，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅＬｅｇｅｎｄｒｅ ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｉｔｓａｎｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｐｌａｑｕｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ Ｌｅｇ