UV-B 辐射增强对苹果采后炭疽病发病情况和抗病相关酶活性的影响.docVIP

UV-B辐射增强对苹果采后炭疽病发病情况 和抗病相关酶活性的影响 吴芳芳，郑有飞，万长健，吴荣军 南京信息工程大学环境科学与工程学院, 江苏 南京 210044 模拟UV-B增强的实验条件，在人工接种的情况下，比较了苹果采后炭疽病的发病情况，测定了一些与抗病相关酶的活性。UV-B增强后，苹果炭疽病斑直径、病斑扩展速率降低，发病指数较对照下降了58.83%。POD活性在处理后第7天时达最大值，为处理前的1.76倍，PPO活性在处理后第6天增加到对照的1.5倍。PAL活性在第6d提高1.74倍,几丁质酶和β－1,3葡聚糖酶活性都有所升高，且它们的变化时程一致。结果表明：UV-B增加限制了苹果采后炭疽病的发展，诱导果实中防御酶活性。 UV-B; 苹果; 发病指数；防御酶中图分类号：X17 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2008）0-0962-04由于平流层臭氧层减薄导致的到达地表紫外线B增强是当今全球性环境问题之一倍受各国科学家关注。大量的模拟试验结果表明：在增强UV-B辐射下许多植物在检测的近300种植物中有2/3的植物——的生长和生物量都有明显的降低[1]。这可能与生物的物质代谢的紊乱有关[2]。目前普遍认为,植物的抗病系统和抗氧化系统影响植物对逆境胁迫抗性的大小，影响植物对有害因素的防御机制，进而改变物质的代谢进程[3]，如抑制CO2固定、加速叶片的衰老、膜脂过氧化和增加植物发病率和发病指数等。然而,增强UV-B辐射对抗病系统的影响研究很少,国内外鲜见报道。为此,本试验以苹果为受试材料,研究增强UV-B辐射下抗病系统的变化,并探讨其变化的原因。果蔬中多酚氧化酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶、β－1,3葡聚糖酶等的活性是植物抗病性的重要指标4-5]。本文在增加UV-B辐射条件下，测定了采后苹果中防御酶PPO、POD、PAL、几丁质酶、β－1,3葡聚糖酶的活性。为UV-B在影响果蔬采后抗病性的机理研究中提供理论依据。 选择大小一致健康的红富士苹果（从南京市白云亭水果批发市场订购）用自来水冲洗后晾干再经75%酒精表面消毒。在苹果上方30 cm处悬挂10个紫外线-B灯管组成一个紫外辐射系统，紫外线-B灯管30 W，波长峰值315 nm，每个灯管用一张0.08 mm乙酸纤维素膜包被，以去除小于290 nm的短波辐射, 辐射剂量用UV-B辐照计测定，再经Caldwell[6]公式转换,获得生物有效辐射(Biologically effective radiation, UV-BBE)。实验的UV-B辐射强度为12.83 kJ/(m2·d)，以无增强UV-B辐射为对照。照射时旋转处理果使受照均匀。UV-B照射后第1、2、3、4、5、6、7、8、9天分别取1 mm厚的果皮组织存于冰箱中,用于测定过氧物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL、几丁质酶和β－1,3葡聚糖酶活性。每天从3个苹果中取样测定酶活性，不同取样时间分别设立3个对照果，共54个苹果。 以浓度为1×105个/mL的苹果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)分生孢子悬浮液针刺接种于健康苹果。10个苹果置于UV-B辐射强度为12.83 kJ/(m2·d)下照射，照射时旋转处理果使受照均匀，10个苹果不接受UV-B辐射设为对照。逐日按十字交叉法测量病斑的直径,并记录发病的严重度。 发病的严重度分为3级：0级指没有形成分生孢子盘；1级表示出现黑色分生孢子盘；2级指分生孢子盘颜色加深，但不成轮纹状排列；3级表示出现深褐色分生孢子盘，且轮纹状排列。 发病率φ=发病果数/检查总果数×100% 发病指数=[Σ(发病级别×该级别个数)/(3×检查总果数)]×100% 　　参照张宪政等7]的方法，测A470值。单位是min-1·g-1·mf。 　　按照Mozzetti等[8]的方法测定酶活性，测定A410值。以3.0 mL不含邻苯二酚的缓冲液加相应酶液做参比，单位是min-1·g－1·mf (鲜质量)。 照射后不同时间取苹果组织切成小块称量在冰浴中用2倍体积的0.1 mol/LpH 8.8硼酸缓冲液(内含15 mmol/L巯基乙醇, w=0.5%抗坏血酸和100 mg PVP)匀浆,12 000 g离心20 min取上清液。反应液为1.6 mL0.1 mol/L-1硼酸缓冲液(pH8.8内含10 mmol·L-1苯丙氨酸)加0.2 mL酶液, 38～40 ℃反应1 h后,加入0.20 mL 6 mol·L-1 HCl终止反应,测A290,以反应时间零作参比。A290变化0.01为一个酶单位(U·h-1·g-1·mf)。 酶液抽提:取照射后不同时间的苹果组织，切成小块，称质量，在4 ℃下，用2倍