不同浓度抗生素的稀释液对牛冷冻精液质量的影响.docVIP

不同浓度抗生素的稀释液对牛冷冻精液质量的影响 宋彩荣 张海涛 张晓霞 朱子岳 王丽云 陈志芬 （北京奶牛中心，北京延庆 102100） 摘要：本试验用添加了不同浓度抗生素的稀释液对5头种公牛精液进行稀释、封装和冷冻，检查牛冻精解冻后的精子活力、畸形率和细菌数。结果表明，抗生素添加范围在1000～2000IU/mL内，冻精活力≥35%，细菌数控制在30个左右，冻精质量符合国家标准。 关键词：抗生素；牛冷冻精液；细菌数；精子活力 种公牛精液质量关系到各地种牛站和广大奶农的切身利益，其中微生物指标是直接影响到牛冷冻精液产品质量的因素之一。各个种公牛站除了加强种公牛采精和冻精制作过程管理以外，还在冻精稀释液中添加了适量的抗生素来抑制牛冻精中微生物的生长繁殖。抗生素添加量的多少除了对冻精细菌数有直接作用外，是否还会影响牛冻精解冻后的活力和畸形率呢？本试验就不同浓度抗生素对牛冻精解冻后的精子活力、畸形率和细菌数进行初步研究和分析，以期得到合理的抗生素添加量，为种公牛冻精生产积累试验数据。 材料和方法 1.1 试验种公牛的选择 选北京奶牛中心种公牛站健康无病、性欲旺盛、鲜精活力≥75%的荷斯坦成年种公牛5头，年龄为6～10岁，试验牛编号1～5。按《种公牛饲养管理技术规程》要求进行公牛的饲养管理，采精员和试剂配制员均为固定人员，采精器械同批次消毒过，每头牛采精2次，间隔30min。 1.2 仪器设备及试剂 相差显微镜(日本奥林帕斯)、RS232精子密度测定仪(德国)、细管灌装一体机(法国卡苏)、电子天平PB203-N（中国梅特勒）、超净化工作台（中国苏净） 、显微电视系统（韩国三星）、青霉素钠/硫酸链霉素（华北制药厂）、鸡蛋（种鸡场3天内生产）。 1.3 稀释液的配制 稀释液为自己配制的卵黄稀释液。将制作好的稀释液分成13等份，分别添加不同浓度的青链霉素浓缩液，使之成为抗生素浓度为0、200、400、600、800、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000和8000IU /mL的稀释液。搅拌均匀后放置35℃的恒温水箱中预热备用。 1.4 精液的稀释和冷冻 采用2次稀释法稀释鲜精。先用不含抗生素的稀释液对每份鲜精进行第一次稀释，稀释后分成13等份。将其中一份作为对照组，只添加等量不含抗生素的稀释液（抗生素浓度为0），另外12份分别添加含有不同浓度抗生素的等量稀释液。稀释后的精液中抗生素浓度分别为0、100、200、300、400、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500和4000IU /mL，在常温下灌装到0.25mL细管内并封口印字，然后在4℃的低温冰柜中平衡3～4h后，放入程序冷冻仪中进行程序冷冻。冷冻时将试验牛的细管精液放在同一层面上，以保证冷冻环境一致。 1.5 冷冻精液质量检查 检查项目人员固定，并且都按照国标GB4143-2008中规定的程序进行操作，检查冻后精子活力、畸形率和细菌数。 1.6 数据处理 对数据采用t检验，使用EXCEL进行处理。 2 结果 2.1不同浓度抗生素对牛冷冻精液细菌数的影响 国标中规定，细菌数为每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数(细菌数≤800个为达标)。由表1可见，随着抗生素浓度逐渐加大，牛冻精中的细菌数呈逐渐降低趋势。为了便于分析统计，再将0～500IU/mL和1000～4000IU/mL分成2组，其中0～500IU/mL细菌数平均为58.55±65.55个，1000～4000IU/mL组为17.67±19.62个，差异极显著(P0.01)。 表1 不同浓度抗生素对牛冷冻精液细菌数的影响（单位：个） 公牛1 公牛2 公牛3 公牛4 公牛5 x±SD x±SD 0 0 86.5 91.5 239 57.5 94.9±88.39 58.55±65.55a 100 0.5 71 89 220 0 76.1±90.01 200 2 39.5 18.5 97 82.5 47.9±40.77 300 20 40 26 41 35.5 32.5±9.17 400 14.5 6 59.5 225 6 62.2±93.68 500 36 77.5 0 65 10 37.7±33.62 1000 0 71 14 6 20 22.2±28.32 17.67±19.62b 1500 4 21 39 46.5 30.5 28.2±16.54 2000 15 0.5 6.5 31.5 28.5 16.4±13.48 2500 18 0 4.5 21.5 21 13.0±10.03 3000 0 0 20 42.5 11 14.7±17.66 3500 0 11 7.5 81.5 4 20.8±34.18 40