高山被孢霉三阶段培养法生产花生四烯酸油脂.docVIP

第 １１ 卷第 ４ 期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ． １１ Ｎｏ． ４  ｄｏｉ：１０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １６７２ － ３６７８． ２０１３． ０４． ００２ 高山被孢霉三阶段培养法生产花生四烯酸油脂 邓中涛，纪晓俊，聂志奎，颜佳铖，黄　 和 （ 南京工业大学 生物与制药工程学院 材料化学工程国家重点实验室，南京 ２１０００９） 摘　 要：为提高高山被孢霉（ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ） 生物合成花生四烯酸油脂的生产效率，基于花生四烯酸油脂的积累机 制，建立了一种三阶段培养法：第一阶段在全培养基中培养促进菌体生物量的快速积累，确定了 ６０ ｇ ／ Ｌ 糖初始质量浓 度时，最有利于生物量的快速积累；第二阶段在 Ｃ 源丰富而其他营养缺乏的条件下培养，促进油脂快速积累，对糖最 佳初始浓度、接种时间、ｐＨ 和培养时间进行了优化；第三阶段培养诱导油脂中花生四烯酸的高效积累，并确定此阶段 培养时间为 ３６ ｈ 时为最佳时间。 实验结果表明：三阶段培养工艺条件下，菌体生物量、油脂量、花生四烯酸量分别为 ４１?? ６、２６?? ６ 和 １１?? ４ ｇ ／ Ｌ，本研究相比传统分批发酵工艺在产率和花生四烯酸最终产量方面都有了显著提高。 关键词：花生四烯酸油脂；微生物油脂；高山被孢霉；三阶段培养 中图分类号：Ｑ９３９． ９７　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ － ３６７８（２０１３）０４ － ０００８ － ０６ Ｈｉｇｈｌｅｖｅｌ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄｒｉｃｈ ｏｉｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｔｈｏｕｇｈ ｔｈｒｅｅｓｔａｇｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｙ ＤＥＮＧ Ｚｈｏｎｇｔａｏ，ＪＩ Ｘｉａｏｊｕｎ，ＮＩＥ Ｚｈｉｋｕｉ，ＹＡＮ Ｊｉａｃｈｅｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｈｅ （ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＭａｔｅｒｉａｌｓＯｒｉｅｎｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ ＡＲＡ） ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａ ｔｈｒｅｅｓｔａｇｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ，ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＡＲＡ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ． Ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｔａｇｅ， ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｆｏｒ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｅｎｔｒｉｃｈ ｍｅｄｉｕｍ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｃｅｌｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ６０ ｇ ／ Ｌ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｅｎｔｒｉｃｈ ｍｅｄｉｕｍ． Ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｓｔａｇｅ，ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｈｉｇｈ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｉｐｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅｒｉｃｈ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈｏｕｔ ｏｔｈｅｒ ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｇｅ， ｐＨ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ． Ｉｎ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｓｔａｇｅ，ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｈｉｇｈ ＡＲＡ ｃｏｎｔｅｎｔｓ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔａｇｅ， ＡＲＡ ｒａｐｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈｏｕｔ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ＡＲＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ３６ ｈ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｒｅｅｓｔａｇｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｈｅ ｄｒｙ ｃｅｌｌ ｗｅｉｇｈｔ，ｔｏｔａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ａｎｄ ＡＲＡ ｒｅａｃｈｅｄ ４１?? ６，２６?? ６ ａｎｄ １１?? ４