简易的单个肿瘤干细胞分离及其培养方法.docVIP

·802·  南方医科大学学报（J South Med Univ）  2012;32(6)  技术方法 简易的单个肿瘤干细胞分离及其培养方法 邓永键 1，蒋 强 1，于莉娜 1，王红霞 1，胡纯婷 1，刘 超 1, 2，丁彦青 1 1 南方医科大学南方医院病理科//南方医科大学基础医学院病理学系，广东 广州 510515；2 广东省人民医院病 理科，广东 广州 510080 摘要：目的 建立一套简单有效的单个肿瘤干细胞分离及培养方法，提高研究的效率与质量。方法 在火焰上轻烤拉伸后的毛细 管，与无菌塑料管连接建立口控毛细管单细胞分离装置。分离单个 SW480 细胞无血清培养筛选出克隆球，CD133、CK7 荧光标 记鉴定；消化克隆球吸取单个肿瘤干细胞并移至石蜡油封闭的微滴及 96 孔板中培养对比观察。 结果 SW480 细胞克隆形成率 约为 1.04%，其 CD133 表达强 CK7 表达弱；口控毛细管单细胞分离装置分离单个肿瘤干细胞的有效率可高达 98.99%；单个肿瘤 干细胞在微滴中培养与在 96 孔板中培养的比较：在分裂时间点上，前两次分裂时间相差无几（P0.05），在微滴中培养的细胞后 续分裂需时较长；在持续扩增的数量上，微滴培养为 11.5%（22/192）而 96 孔板为 9.2%（17/184），两者差异无统计学意义（P 0.05）。结论 单个 SW480 细胞无血清培养可形成肿瘤干细胞球，口控单细胞分离装置能够有效分离单个肿瘤干细胞，石蜡油封 闭微滴培养法和 96 孔板培养法均能够有效扩增单个肿瘤干细胞。但石蜡油封闭微滴培养法操作灵活、观察便捷、环境稳定，可 作为培养单个肿瘤干细胞的首选。 关键词：肿瘤干细胞；单细胞分离；微滴培养 中图分类号：R36 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）06-0802-05 doi: 10.3969/j.issn.1673-4254.2012.06.010 /kcms/detail/44.1627.R1657.003.html  A simple method for isolating and culturing single cancer stem cells DENG Yongjian1, JIANG Qiang1, YU Lina1, WANG Hongxia1, HU Chunting1, LIU Chao1, 2, DING Yanqing1 1 China; 2Department of Pathology, Guangdong Provincial Peoples Hospital, Guangzhou 510030, China Abstract: Objective To develop an effective method for isolating and culturing single cancer stem cells. Methods The capillary glass tube was stretched on fire and connected to a sterile plastic tube to prepare the single cell separation apparatus. Single SW480 cell clone spheres in serum-free culture were marked with CD133 and CK7, and the single cancer stem cells were separated and cultivated in 96-well plates or microdrops covered by paraffin. Results SW480 cell clone formation rate was about 1.04%, and the cell clone spheres highly expressed CD133 with low CK7 expression. The isolation of the single cancer stem cells showed a success rate of 98.99% using the separation device. The cell division profile was comparable between the cell cultures in microdrop and 96-well plates in the initial 2 cell divisions (P0.05), whereas prolonged ce