松材线虫低温冷冻保存的影响因子.pdfVIP

· 6 · ForestPestandDisease Ju1． 2013 No．4 松材线虫低温冷冻保存的影响因子 朱丽华，张文莉，郑俊俊，季锦衣，叶建仁 (南京林业大学森林资源与环境学院，江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室，江苏 南京 210037) 摘要：比较 了保护剂平衡时间、解冻温度、线虫浓度及线虫发育期对低温冷冻松材线虫存活的影响。 结果表明，平衡时间对冷冻保存有较大影响，以20％甘油为保护剂，在4℃下平衡 12h后转入一80 ℃超低温冰箱，1d后线虫存活率为(41．7±4．9)％；冻存存活率与线虫发育期有一定关系，幼虫显 著高于成虫，幼虫、雌成虫和雄成虫的存活率分别为(31．5±7．4)％，(7．9％ ±3．5)％，(6．6± 2．8)％。在所选择的解冻温度(30～45℃)和线虫浓度(10500条／mL～84000条／mL)范围内，解 冻温度及线虫浓度对存活率影响差异不明显。 关键词：松材线虫；冷冻保存 ；甘油；平衡时间；发育阶段 中图分类号：$763．16 文献标志码 ：A 文章编号：1671—0886(2013)04—0006—03 Factorsaffecting thecryopreservation ofpinewoodnematode，Bursaphelenchusxylophilus／ZHU Lihua，eta1．(JiangsuKeyLaboratoryforPreventionandManagementofInvasiveSpecies；Collegeof forestryresourcenadenvironment，NanjingForestryUniversity，Nanjing210037，China) Abstract：Theeffectofequilibrium time，thawingtemperature，initialconcen~afionofnematodesuspen— sionanddevelopmentstageofBursaphelenchusxylophilusonsurvivalofcryopreservednematodeswere evaluated．Theresultsindicatedthatequilibrium timehadsignificanteffectonhtesurvivalofcryopre— servedB．xylophilus．Significantlymorenematodesweremotileaftercryopreservationinglycerol20％ andequilibratedat4℃ ofr12handhtenplacingina 一80oC freezerthandirectlyplacingthem in freezer．TheaveragesurvivalrateofB．xylophiluswas(41．7±4．9)％．Morejuvenilessurviveddeep freezinghtna adults．Theaveragesurvivalrateofjuveniles，femalesandmaleswere(31．5±7．4)％， (7．9±3．5)％，(6．6±2．8)％，respectively．So，nematodesshouldbeharvestedofrcryopreservation from juststarvedplateswherejuvenilesexistpredominnatly．Thawingtemperature(3045oc)nadcon— centrationofnematode(10500／mL一84O00／mL)didn’taffecthtesurvivalabilityofcryopreserved nematodes． Keywords：Bursaphelenchusxylophilus；cryopreservation；glycerol；equilibrium time；developmentstage 松树萎蔫病是 由松材线虫Bursaphelenchusxy- 存是生物材料长期保存的有效途径，也为大量线虫 lophilus引起的一种毁灭性森林病害，自Et本 1905 虫株的保存提供了便