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图6-6 酶促反应速率与底物浓度的关系 2 ．米氏方程― 定量表达底物浓度与酶反应速率的关系 为了解释上述现象，并说明酶促反应速率与底物浓度间量的关系，Michaelis L 和Menten M L 进行了大量的定量研究，积累了足够的实验数据，从而提出了酶促反应动力学的基本原理，并归纳成一个数学式，称为米氏方程(Michaelis Menten equation ) : 此式反应了底物浓度与酶促反应速率间的定量关系，式中vmax为最大反应速率；cs为底物浓度；Km为米氏常数（Miohaelis constant ) ; v为cs不足以产生最大速率vmax时的反应速率。 根据Hend 提出的中间产物理论，酶促反应可按下列两步进行： 反应中每一步都有各自的速率常数：由酶和底物生成不稳定中间复合物ES 的速率常数为k1，反向反应速率常数为k2；由ES 转变成产物的速率常数为k3 ，反向速率常数为k4。由于P+E 形成ES 的速率极小（特别是在反应处于初速阶段时，产物P 的量很少），故k4可忽略不计。 根据质量作用定律，由E+S 形成ES 的速率为： 式中cE 为酶的总浓度（游离酶与结合酶之和）； cES为酶与底物形成的中间复合物的浓度； cE-cES即为游离酶的浓度； cS为底物浓度。通常底物浓度比酶浓度过量得多，即cS 》cE，同理因而在任何时间内，与酶结合的底物的量与底物总量相比可以忽略不计。 同理 , ES 复合物的分解速率，即cES的减少率可用下式表明： 当处于恒定状态时， ES 复合物的生成速率与分解速率相等，即： 将式（6-4 ）移项整理，可得到： 二、酶的活性与其高级结构的关系 1 ．活性中心― 酶分子中只有很小的结构区域与活性直接相关 2 ．牛胰核糖核酸酶拆合实验― 二级结构、三级结构与酶活性的关系 3 ．聚合与解聚― 四级结构与酶活性的关系 4 ．同工酶― 高级结构与酶活性关系的典型 1 ．活性中心― 酶分子中只有很小的结构区域与活性直接相关 酶的活性不仅取决于其一级结构，而且与其高级结构密切相关。就某种程度而言，在酶活性的表现上，高级结构甚至比一级结构更为重要，因为只有高级结构才能形成活性中心。通常把酶分子上必需基团比较集中并构成一定空间构象、与酶的活性直接相关的结构区域称为酶的活性中心（active center ）或活性部位（active site ）。活性中心是直接将底物转化为产物的部位，它通常包括两个部分：与底物结合的部分称为结合中心（binding center ) ；促进底物发生化学变化的部分称为催化中心（catalvtic center ）。前者决定酶的专一性，后者决定酶所催化反应的性质；有些酶的结合中心和催化中心是同一部位。 2 ．牛胰核糖核酸酶拆合实验― 二级结构、三级结构与酶活性的关系 酶的一级结构、三级结构是所有酶都必须具备的空间结构，是维持酶的活性部位所必需的构象。当酶蛋白的二级结构和三级结构彻底改变后，就会使酶的空间结构遭到破坏从而使其丧失催化功能，这是以蛋白质变性理论为依据的。另外，有时使酶的二级结构和三级结构发生改变，能使酶形成正确的催化部位从而发挥其催化功能。山于底物的诱导而引起酶蛋白空间结构发生某些精细的改变，与相应的底物相互作用，从而形成正确的催化部位，使酶发挥其催化功能，这就是诱导契合学说（inducedfit theory ，见本章第三节）的基础。 2 ．牛胰核糖核酸酶拆合实验― 二级结构、三级结构与酶活性的关系 用枯草杆菌蛋白酶（subtilisin ）水解RNase 分子中的Ala20 -Ser21 间的肽键，其产物仍具有活性，称为RNase S 。产物中含有两个片段：一个小片段，含有20 个氨基酸残基（1 一20 ) ，称为S 肽；一个大片段，含有104 个氨基酸残基（21 一124 ) ，称为S 蛋白。S 肽含有His12 , S 蛋白含有His119 。S 肽与S 蛋白单独存在时，均无活性，但若将二者按1 : 1 的比例混合，则能够恢复酶活性，虽然此时第20 位与第21 位之间的肽键并未恢复。这是因为S肽通过氢键及疏水作用与S 蛋白结合，使His12和His119在空间位置上互相靠近而重新形成了活性中心（图6 -1）。可见，只要酶分子保持一定的空间构象，使活性中心必需基团的相对位置保持恒定，一级结构中个别肽键的断裂，甚至某些区域的小片段（如RNase 中的第15 一20 残基）的去除并不影响酶的活性。 图6-1 牛胰核糖核酸酶分子的切断与重组 3 ．聚合与解聚― 四级结构与酶活性的关系 具有四级结构的酶，按其功能可分为两类：一类与催化作用有关，另一类与代谢调节关系密切。只与催化作用有关的具有四级结构的酶由几