蛋白质与三氯乙酸相互作用的共振散射光谱研究及分析应用.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 1 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 70～73 蛋白质与三氯乙酸相互作用的共振散射光谱研究及分析应用 1 2 2 1 蒋治良 　邹节明 　王力生 　覃爱苗 1 ( ) 2 ( ) 广西师范大学资源与环境学系 ,桂林 541004 　　 桂林三金药业集团公司 ,桂林 541004 ( ) γ 摘 　要 　三氯乙酸 TCA 与酪蛋白、明胶、球蛋白、HSA 、BSA 结合形成缔合微粒 ,均使体系的共振散射信号 显著增强 ,在 470 nm 处产生一共振散射峰。在选定条件下 ,几种蛋白质在一定浓度范围内与 I470 nm 呈线性关 系。建立了定量测定蛋白质的共振散射光谱分析新方法。该法操作简便 ,灵敏度高 ,线性范围宽 ,重现性较 好 ,可用于多种蛋白质的测定。本法应用于合成样品及人血清样品中蛋白质的定量分析 ,结果满意。 关键词 　三氯乙酸 ,蛋白质 ,缔合微粒 ,共振散射光谱 1 　引　　言 ( ) 蛋白质是生命现象的物质基础 。有些蛋白质 如酪蛋白等 是测定水解蛋白酶活性的重要底物 ,其 定量分析是生命科学、临床检验及生化研究等领域的重要课题。测定蛋白质含量常用分光光度法和荧 1 ～3 ( ) 光光度法 。近来 ,共振散射光谱 RSS 作为一种高灵敏的光谱分析新技术已应用于蛋白质等生物大 分子和痕量金属的测定2 ,4 ,5 ,及液相纳米粒子特性的研究等6 ,7 。在蛋白质的 RSS 分析法中 ,研究最多 的是染料蛋白质体系 ,很多人认为是染料结合在蛋白质分子表面 ,形成较大的聚集体 ,导致 RSS 信号急 剧增强。我们发现 ,在酶分析中常用的中止剂三氯乙酸与蛋白质形成缔合微粒时引起 RSS 急剧增强 , 并在 470 nm 产生 RSS 峰 ,其 I470 nm 的增强与蛋白质浓度呈线性关系 ,据此建立了测定蛋白质的 RSS 新方 法。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂 ( ) ( ) RF540 型荧光分光光度计 日本岛津公司 ;UV8500 紫外可见分光光度计 上海天美公司 。 ( ) ( ) 蛋白质溶液 1000 mgL 用相应的牛血清白蛋白 BSA ,华美生物工程公司 ,生化试剂 、人血清白蛋 ( ) γ (γ ) 白 HSA ,华美生物工程公司 、球蛋白 G,成都蜀阳企业有限公司 、酪蛋白、明胶配制。40 mgL HSA γ ( γ) 和 G 质量比为 2 :1 的混合标准溶液 H～ 。2. 5 mol/ L TCA 溶液。所用试剂为分析纯 ,所用水均为二 次蒸馏水。 2. 2 　实验方法 在 10 mL 比