华山新麦草α-醇溶蛋白基因的克隆及原核表达.pdfVIP

11 1 中国农业科学 2011,44(8):1533-1542 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.08.001 华山新麦草α-醇溶蛋白基因的克隆及原核表达 王玉卿，赵继新，庞玉辉，降彦苗，陈新宏，武 军，刘淑会 (西北农林科技大学农学院，陕西杨凌 712100) 摘要：【目的】克隆华山新麦草（Psathyrostachys huashanica ）的α-醇溶蛋白基因，并对其进行生物信息 学分析，构建该基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】采用同源克隆法从华山新麦草基 因组DNA 中分离克隆出α-醇溶蛋白基因并进行序列分析，将克隆的华山新麦草α-醇溶蛋白基因Gli-Ns-5 克隆到 表达载体pET-28a(+)上，获得重组质粒pET28a-Gli-Ns 转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】从华山新麦 草基因组DNA 中克隆了4 个α-醇溶蛋白基因：Gli-Ns-2 （FJ713595）、Gli-Ns-3 （GQ139525）、Gli-Ns-4 （GQ139526） 和Gli-Ns-5 （GQ139527）。序列分析表明，4 条序列具有α-醇溶蛋白的典型结构特征，含有8 个或9 个半胱氨酸 残基，序列 FJ713595 为假基因。利用所构建的大肠杆菌表达载体，经 IPTG 诱导，华山新麦草α-醇溶蛋白基因 Gli-Ns-5 （GQ139527）可在原核系统中特异性表达。Western-blot 证实融合蛋白可成功表达。【结论】克隆了 4 个华山新麦草的α-醇溶蛋白基因序列，基因 Gli-Ns-5 （GQ139527）可在原核表达系统中成功表达，为小麦品质 改良提供了新的候选基因。 关键词：华山新麦草；α-醇溶蛋白；基因克隆；序列分析；原核表达 Cloning and Prokaryotic Expression of α-Gliadin Gene from Psathyrostachys huashanica WANG Yu-qing, ZHAO Ji-xin, PANG Yu-hui, JIANG Yan-miao, CHEN Xin-hong, WU Jun, LIU Shu-hui (College of Agronomy, Northwest AF University, Yangling 712100, Shaanxi) Abstract ：【Objective 】 The present study aimed at cloning and analyzing the α-gliadin genes from Psathyrostachys huashanica and expressing it in E.coli. 【Method 】The α-gliadin genes were amplified from P . huashanica by AS-PCR and then the cloned gene Gli-Ns-5 was inserted into pET-28a(+). The recombinant plasmids pET28a-Gli-Ns were expressed in a prokaryotic expression system after its transformation into BL21(DE3) pLysS host strain. 【Result 】 Four new α-glidain genes, Gli-Ns-2 (FJ713595), Gli-Ns-3 (GQ139525), Gli-Ns-4 (GQ139526) and Gli-Ns-5