鸡GM-CSF 与生长抑素表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

11 1 遗传育种 ·GeneticsandBreeding 2012年第48卷第9期 鸡GM-CSF与生长抑素表达载体的构建及 在大肠杆菌中的表达 刘贺山，袁陶燕，吴兵兵，宣莹莹，王 勇，倪敏杰，傅 衍，牛 冬* （浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310058） 本研究运用RT-PCR技术从萧山鸡脾脏细胞总RNA中扩增获得鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 （GM-CSF）成熟区序列，并进一步通过设计重叠引物构建出GM-CSF-SS（SS:生长抑素）嵌合基因，并将其在大 肠杆菌中进行表达。结果表明：实验成功得到鸡GM-CSF成熟区片段（435bp）和GM-CSF-SS嵌合基因（486bp）， 并在大肠杆菌中成功表达出GM-CSF和GM-CSF-SS融合蛋白，分子量分别约为18ku和20ku，该研究为通过 免疫途径提高动物生长性能提供基础。 关键词：GM-CSF；生长抑素；嵌合基因；鸡 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： 动物生长除受遗传、饲料和环境条件等因素的 毒抗原等安全。 影响外，同时受一系列生长轴激素的调控，其中生长 本实验从鸡脾脏中提取细胞总 RNA，经 激素（GH）起着核心作用，而GH又受生长激素释放 RT-PCR扩增出鸡GM-CSF，并将其克隆至pMD-18T 因子（GRF）和生长抑素（SS）的双向调控，前者促进 载体，再以该载体为模板，通过引物重叠PCR扩增 其释放，后者则起抑制作用[1] 。生长抑素（SS）是一种 得到GM-CSF-SS嵌合基因，将其克隆至原核表达载 14肽，不仅对生长激素有抑制作用，还能抑制胰岛 体pET-28a(+)，构建重组表达质粒pET28-GM-CSF-SS， 素、甲状腺素及一些促进消化吸收的胃肠激素的分 并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达，为下一步通 泌和释放，因而它是调节动物生长的一个重要因子。 过动物免疫提高生长性能提供基础。 据研究，采用免疫反应原理，通过中和体内的SS，可 材料与方法 解除其对生长的抑制作用，使血液中的生长激素及 1.1 载体 pET28a(+)vector(Invitrogen公司产品), 其他相关激素水平增高，促进动物生长。但由于SS 分子量很小，免疫原性较差，因此本研究将SS与免 pMD18-Tvector（TaKaRa公司产品）。 1.2 菌株 克隆宿主菌株： Top10；表达宿主 疫增强因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 菌株： BL21（DE3）（Invitrogen公司产品）。 （GM-CSF）联合免疫，增强机体免疫应答，提高免疫 1.3 质粒提取 试剂盒、胶回收试剂盒分别购自北 效果。GM-CSF是一个具有多项潜能的细胞因子，与 目的抗原共同免疫时，可通过募集和活化淋巴细胞， 京博大泰克生物基因技术有限责任公司和爱思进生 促进目的抗原的摄取、加工和提呈，增强协同刺激分 物技术有限公司。