细胞培养技术动物细胞培养.pptVIP

第一章 动物细胞培养概述 组织培养：从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。有时泛指所有的体外培养。 器官培养：从生物体内取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。 二、动物细胞培养的特点 三、动物细胞培养发展史 培养方法的发展 悬滴培养法 旋转管培养法 灌注小室培养法 单层细胞培养法 培养器材的发展 盖玻片 卡氏瓶 玻璃培养瓶 塑料培养皿、塑料培养瓶、塑料培养板（一次性） 细胞培养液的发展 天然培养基（胎汁、血浆和血清） 人工合成培养基（需添加血清） 无血清培养基 四、细胞培养的常用术语 原代培养： 从体内取出细胞或组织的第一次培养。 传代：将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。 单层培养：培养细胞在固体基质上长成单层的培养方式。 悬浮培养：细胞在培养液中成悬浮状态生长的培养方式。 汇合：细胞相互连接成片占据所有底物面积的状态。 五、动物细胞培养的应用 细胞培养广泛应用于生命科学的各个研究领域，是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段：病毒学（细胞是培养病毒的最好基质）、细胞生物学（用于细胞形态、结构、功能等方面的研究）、毒性实验及安全性实验的工具、遗传疾病的检测等。 通过细胞培养生产出许多与人类健康和生存密切相关的生物药物如：疫苗、干扰素等。 思考题： 总结动物细胞、组织、器官培养的异同。 和微生物细胞比，动物细胞培养有怎样的不同？ 第二章 动物细胞培养的基本知识 一、培养细胞的特性 贴附生长： 必须贴附于支持物表面才能生长(这种细胞称为贴壁依赖性细胞)。大多数细胞是这种生长方式。 这类细胞存在接触抑止和密度依赖性的生长特性。 悬浮生长： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面(这种细胞称为非贴壁依赖性细胞) 。如某些癌细胞和血液白细胞。细胞悬浮生长时胞体为圆形。这类细胞容易大量繁殖。 2、培养细胞的类型 贴附生长的细胞，大多只附着一个平面，因而培养细胞的外形一般与体内明显不同。 按照培养细胞的形态，主要可分为以下四种类型： 成纤维细胞型： 上皮细胞型： 游走细胞型： 多型细胞型： 3、培养细胞的生长过程 原代培养期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。 传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入衰退期。 衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。 在细胞生命期阶段，少数情况下，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性，细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞转化亦可用人工方法诱发。  2）每代贴附生长细胞的生长过程 游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。一般 10分钟一4小时。 贴壁期：贴附底物,一般24小时内贴壁。 潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。 对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 二、培养细胞的生长条件 1 、细胞的营养需要:广泛使用添加血清的人工合成培养基 2、 细胞的生存环境 水：新鲜三蒸水 温度: 37 ℃ 气体条件： 含5% CO2的无菌空气 Na HCO3 +H2O ← → Na + + HCO3- +H2O ← → Na + + H2CO3 + OH- ← → Na + + OH- + CO2 + H2O pH: 7.2-7.4(通过在培养液中添加Na HCO3和HEPES来实现) 渗透压：260－320mmol/L（通过在培养液中添加多种无机盐、碳水化合物来实现） 3、无毒、无污染 三、动物细胞培养的常用设备和工具 压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料养皿和培养板等表面消毒