双向凝胶电泳在临床血浆蛋白质组学研究中的技术难点和解.pdfVIP

维普资讯 第 25卷 第 4期 北京生物 医学工程 Vo1．25 No．4 2006年 8月 BeijingBiomedicalEngineering Aug． 2005 双向凝胶电泳在临床血浆蛋 白质组学研究中的技术难点和解决方法 罗小云 吴庆华 中图分类号 R318．5 文献标识码 A 文章编号 1002—3208 (2006)04—4034—03 随着双 向电泳技术 中固相化 pH梯度 的发 明、电喷雾 1 临床血浆蛋 白质组研究的难点 质谱 、基质辅助激光解析 电离飞行时间质谱技术 的应用 ， 蛋 白质组学技术已经越来越多 的应用于疾病 的研究 中。临 1．1．血浆蛋白质组成分种类繁多 床蛋 白质组学 已经成为 目前医学研究中的热点 。血液标 血浆蛋 白质组不仅含 由肝脏 、小肠等合成的蛋 白如 白 本因取材简便、应用价值高，因此血浆蛋 白质组学最具有 蛋 白，而且包含的免疫球蛋 白的种类可达上千万种。另外， 应用前景，并成为临床蛋 白质组学研究中关注的重要 问题 。 疾病或生理过程 中组织释放入血 的泄漏蛋 白可达 4JD多万 临床血浆蛋 白质组学主要是采用 比较蛋 白质组学进行 种 ，以内分泌腺体等分泌释放入血通过血循环进行功能调 研究，通过 比较患者和健康人、疾病 的不 同时期 、疾病 的 节 的各种肽类激素，还有细菌感染或寄生虫等释放入血 的 不 同类型的血浆蛋 白质组的表达 ，在血浆或血清 中筛选疾 外源性蛋白等 ，因此蛋 白种类极其丰富。 病相关性 的蛋 白、抗原 ]、抗体或标志物 ，对于疾病 的 1．2 血浆蛋 白是复杂多样的蛋 白质组 诊断、治疗的检测、预后等具有指导意义，为疾病 的病 因 一 种蛋白即可包含有蛋 白前体 、剪切体 、糖基化 、水 学和病理生理 、治疗等提供线索 。 目前血浆蛋 白质组学 解后肽段等多种形式。同时还存在蛋 白一蛋 白复合物、蛋 在疾病研究 中应用 的越来越 多 ，如肺癌 。、胃癌 、前列腺 白一糖类、蛋白与脂类等复合物。因此在 电泳 图谱上、同 癌、乳癌 ’、肝癌 ，卵巢癌 等患者血清 中均发现有特 一 种蛋白可表现为多个点，代表蛋白的各种修饰体、亚基、 异的肿瘤标志物。在心梗 、心功能衰竭 患者 中也寻找到特 肽段 。同样 多个蛋白点鉴定出来可能是 同一蛋 白。因此增 异的生物标志 。。 目前虽然已有基于质谱分析 的血浆蛋 白 加了研究的复杂性和难度 ，但也提供 了研究蛋 白复合物和 质组学的各种技术 ，但是仍处于初级阶段 。双 向凝胶 电 蛋白质结构与功能变化 的线索 。蛋 白质组学技术对于发现 泳作为唯一能同时平行进行大量蛋 白复合物的定量表达检 复杂生物基质 中特异性蛋 白的氨基酸序列和转录后 的调节 测的技术 ，仍是 目前最为广泛研究和应用的主要技术。 目 是一种敏感性较高的有效方法 。例如对血浆 a—l一抗胰蛋 白 前的固相 pH梯度 蛋 白电泳技术改进 了以前两性载体 电解 酶同工酶在正常人和三种不 同的 a—l一抗胰蛋 白酶缺陷和先 质双向凝胶 电泳在可重复性 、操作性 、分辨率等方面 的缺 天性 Ia糖基化异常的多肽序列和糖基化的特性鉴定 。此 点。多重窄范围胶条可提高分辨率 (Apl=0．001)，结合样 外血浆 中含有各种盐类 、电解质、糖类 、脂类、核苷酸、 品的预分离技术 ，可 以分辨 5000以上个蛋 白 (常规可达 以及代谢产物等，这些均不利于双 向电泳的分离 。含盐过 2000蛋 白)以及小于 lng的蛋 白点 。双向凝胶 电泳不像 多导致蛋