骨髓脂肪细胞去分化的实验研究.pdfVIP

中文摘要 骨髓脂肪细胞去分化的实验研究 目的： 观察骨髓成熟脂肪细胞在体内外去分化过程，检测去分化过程中相关基因、 蛋白表达，证实体内外骨髓成熟脂肪细胞可以去分化为去分化脂肪细胞并分析其 作用机制。从而为再生障碍性贫血、骨质疏松症等骨髓脂肪化疾病的研究提供实 验依据，为改善造血微环境，增加造血细胞植入，缩短骨髓移植患者骨髓造血恢 复期寻找途径。 方法： 60 6.0Gy Co SPF 8 BALB/c 体内实验：通过 γ射线照射 级 周龄 雌性小鼠建立小鼠 骨髓脂肪化模型，在骨髓脂肪化和骨髓造血恢复过程中取小鼠股骨制作骨髓切 HE 片， 染色和免疫荧光化学观察骨髓造血细胞、脂肪细胞、前体脂肪细胞的变 化，TUNEL凋亡检测技术检测骨髓中细胞凋亡情况。 体外实验：分离提取老年髋、膝关节置换患者骨髓成熟脂肪细胞，天花板培 养法培养；显微镜下观察骨髓成熟脂肪细胞去分化过程中细胞形态的改变；油 O RT-PCR 红 染色观察细胞中油脂的变化； 检测成脂相关基因、脂肪酸代谢相关 基因及干细胞基因的表达，Western blot检测Pref-1的表达，并与成熟脂肪细胞、 骨髓间充质干细胞比较。 结果： 60 体内实验：经Co γ射线辐射处理小鼠经历骨髓脂肪化期和骨髓造血恢复期， 辐射第48d骨髓腔中存在大量的前体脂肪细胞，同时造血恢复过程中成熟脂肪细 胞大量减少，但是未检测到成熟脂肪细胞相应数量的凋亡和坏死，故推测出这些 前体脂肪细胞来源于骨髓成熟脂肪细胞的去分化，为去分化脂肪细胞。 体外实验：成功分离提取、培养了人骨髓成熟脂肪细胞，并在天花板培养过程 中观察到成熟脂肪细胞变成长梭型的去分化脂肪细胞，并且获得增殖能力。去分 化过程中成脂相关基因、脂肪酸代谢相关基因的表达减少，干细胞基因表达增加 及去分化过程中Pref-1的蛋白表达增加。 结论： 在体内、体外，成熟骨髓脂肪细胞都可以去分化为去分化脂肪细胞，去分化 I 过程伴随着成脂相关基因、蛋白及去分化脂肪细胞标记物Pref-1的变化。 关键词 Pref-1 Co60 去分化脂肪细胞；成熟脂肪细胞；去分化； ； γ射线；天花板培养 法 II Abstact Abstact AAbbssttaacctt EmpiricalStudy of bonemarrowadipocytededifferentiation EmpiricalStudy of bonemarrowadipocytededifferentiation EEmmppiirriiccaallSSttuuddyyooffbboonneemmaarrrroowwaaddiippooccyytteeddeeddiiffffeerreennttiiaattiioonn Aim: Aim: AAiimm:: Toobserve the dedifferentiation process of bonemarrow mature adipocytes in vivo andinvitro, toinvestigate the change of gene andprotein expression during dedifferentiation, toprove that bone marrow mature adipocytes candediff