胶束薄层色谱的色谱特征研究及其在中药甘草质量控制中的应用.docVIP

胶束薄层色谱的色谱特征研究 及其在中药甘草质量控制中的应用 林丽琼 梅南晟 周辉 朱俊威 陈颖珠 （深圳职业技术学院生物应用工程系现代制药技术专业，深圳，518055） 摘 要 中药的质量是中药现代化、国际化的瓶颈，发展新的中药质量控制方法，对保证中药功效，推进中药走向世界，具有非常重要的现实意义。本文从改进薄层色谱重现性差的角度出发，首次对胶束薄层色谱的色谱特征进行了深入系统的研究，建立了甘草新型胶束薄层指纹图谱方法。80％甲醇提取甘草有效成分群，采用聚酰胺薄膜，以4％SDS水溶液-正丁醇-冰醋 酸（9：1：1）为展开剂，上行展开，展开结果在366nm紫外光下数码摄像和254nm紫外吸收扫描。结果表明，甘草胶束薄层色谱可避免供试液的繁琐“清洗”步骤；展开过程影响参数少、容易控制；胶束有明显的荧光增强效应。对于上述胶束薄层特征的机理，作者从胶束的增溶作用、胶束展开剂对展开过程气相的影响和胶束能减少分子运动等方面进行了探讨。应用胶束薄层色谱指纹图谱技术，首次实现无需衍生即可区分药典收录的三种甘草药材；吸收扫描指纹结果可用于甘草药材采收期的确定。本法操作简便、快速、准确、价廉、重视性好、信息量大，。超强的灵活性、分析时间短、分析每一样品花费低能够提供图像用以直接观测并传达色谱结果优点。Glycyrrhiza inflata Bat.）或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根及根茎。其中乌拉尔甘草是中药甘草的主要品种。甘草为重要的常用中药，素有“国老”之称，具止咳化痰、解毒清热、缓急止痛及调和诸药等作用，俗称“十方九草”，在临床上有大量的应用。甘草的主要化学成分是三萜类和黄酮类化合物[2，3]，还有少量的生物碱、木质素、糖类及氨基酸等。目前，中国药典主要采用硅胶薄层色谱鉴别、三萜类化合物甘草酸的含量测定（HPLC法）作为质控指标[4，5]，国内外大量的质控研究也都是围绕甘草酸的含量测定方法而进行[6]。本文则尝试建立新的甘草薄层色谱方法，要求方法简单，容易操作和控制，能提供大量可供鉴别和质量控制的指纹信息。 1979年Armstrong等[7]首先报道了胶束薄层色谱法。尽管胶束薄层与常规薄层相比具有价廉、安全、无毒、独特的选择性、荧光信号增强及适用性广等优点，胶束在薄层色谱中的应用潜力还未得到充分的挖掘，更重要的是，胶束的使用对薄层色谱操作过程的影响还未见系统的研究及探讨[1]。本文则从胶束对整个薄层色谱过程的影响入手，侧重胶束对薄层色谱不易控制参数的改进，提高薄层色谱的可靠性和重现性，以使其更适合GMP/GAP企业质量控制需要。同时，对胶束薄层色谱在中药甘草的质量控制方面的应用进行了探索。 2．实验部分 2．1 仪器与材料 CAMAG Linomat 5半自动点样仪、CAMAG ReproStar 3 薄层色谱数码成像系统、CAMAG Scanner3 薄层色谱扫描仪。Grant XB14超声波清洗机。聚酰胺薄膜（浙江台州四青生化材料厂）。 对照品包括甘草酸单铵盐（中国亿利资源集团公司李秉经理提供），甘草苷、异甘草苷（厦门大学傅博强博士制备），甘草查尔酮甲（厦门大学王巧娥博士制备）等。胀果甘草和乌拉尔甘草对照药材购于中检所，其余药材由亿利资源集团公司提供，全部药材样品由中国医学科学院药用植物研究所林寿全教授鉴定。十二烷基硫酸钠（SDS）、实验溶剂均为分析纯，水为超纯水。 2．2 供试品溶液的制备 精密称取甘草药材粉末0.5g，加入80％甲醇溶液40ml，超声提取40min，离心。上清液挥干，加1ml甲醇定容，作为供试品溶液。 2．3 胶束展开剂和有机展开剂的配制 为了寻找甘草的合适胶束展开剂和有机展开剂，笔者进行了大量试验条件的摸索（具体内容另文发表），最后确定甘草胶束展开剂组成为：4％SDS水溶液-正丁醇-冰醋酸（9：1：1）,这里正丁醇作为胶束改性剂，冰醋酸抑制拖尾。有机展开剂：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸（17：1：1）。 2．4薄层色谱实验条件 每个样品用CAMAG Linomat５半自动点样仪带状点样1.5μL于聚酰胺薄膜上，点样后即展开（其中以胶束为流动相时可使用单槽或双槽展开室，使用有机溶剂流动相需用双槽展开室），上行展开，展距分别为90mm(鉴别)和150mm（扫描）。取出，晾干。进行数码摄像和薄层扫描，Wincats软件自动进行数据处理。 3．结果与讨论 3．1 胶束薄层色谱供试液制备特点 薄层色谱由于样品供试液中所有成分均可在薄层板上观察，所以杂质成分对色谱的干扰是“显性”的，可直观地反映在薄层色谱上，甚至直接影响薄层色谱的清晰度和分离度，因此样品供试液的预处理常常是需要考虑的步骤之一[8]。尤其对于甘草等根类药材，糖份含量往往较高，一般需要采取不同极性溶剂提取、多次萃取