基础研究条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞….pdfVIP

·146 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2012;32(2) 基础研究 条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡 1，2 2 2 2 2 3 杨旭辉 ，夏 添 ，余伟华 ，卢晓芳 ，项 鹏 ，何 峰 1 2 广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科，广东 广州 510010 ；中山大学中山医学院干细胞与组织工程中心， 3 广东 广州 510080 ；中山大学药学院，广东 广州 510006 2 摘要：目的探讨肿瘤细胞B 16F 10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠（VitC Na）介导的凋亡作用。方法常规在75 cm 培养瓶中 培养小鼠黑色素瘤细胞B 16F 10，待细胞长至90%~95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液，用PBS 反复清洗后加入无血清的 DMEM/高糖10 ml 在培养箱中培养6~8 h ，收集培养液用2500 r/min 离心5 min 后上清用0.22 μm 滤器过滤，-20 ℃保存备用，在 6 6 孔板中每孔接种1×10 B 16F 10，常规培养24 h 后，实验组每孔加入2 ml 条件培养液（含有10%胎牛血清），对照组用普通培养 液，两组均用10 mmol/L VitC Na 促凋亡，分别在3、6、24 h 观察细胞凋亡情况，hoechst 染核，收集细胞免疫荧光检测caspase3 和 TUNEL、RT-PCR 检测Bcl2 表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000 和小于5 000 成分，分别煮沸，用蛋白酶K 灭活后对B 16F 10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na 介导的小鼠黑色素瘤细胞B 16F 10凋亡，抗凋亡成分小 于5 000 ，且不能被煮沸和蛋白酶K 灭活，提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B 16F 10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。 关键词：黑色素瘤；细胞凋亡；L-抗坏血酸钠；条件培养基 中图分类号：R34 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）02-0146-05 DOI: CNKI:44-1627/R1506.026 /kcms/detail/44.1627.R1506.026.html Mouse melanoma cell line B16F10-derived conditioned medium inhibits sodium L-ascorbate-induced B16F10 cell apoptosis 1,2 2 2 2 2 3 YANG Xuhui , XIA Tian , YU Weihua , LU Xiaofang , XIANG Peng , HE Feng 1Assisted Reproductive Center, Guangdong Women and Childrens Hospital, Guangzhou 510010, China; 2 Center for Stem Cell and Tissue Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China; 3 School of Pharmaceutical Sciences, Su