静电纺丝制备苯乙烯马来酸酐共聚物纳米纤维及其固定化-D-半.pdfVIP

第 10卷第4 期 过 程 工 程 学 报 Vol.10 No.4 2010 年 8 月 The Chinese Journal of Process Engineering Aug. 2010 静电纺丝制备苯乙烯马来酸酐共聚物纳米纤维 及其固定化β-D-半乳糖苷酶 1,2 1 1 郑国建 ， 张松平 ， 张羽飞 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190 ；2. 中国科学院研究生院，北京 100049) 摘 要：采用静电纺丝技术制备苯乙烯−马来酸酐共聚物纳米纤维，最佳电纺条件为：聚合物浓度 0.35 g/mL、针尖到 接收板距离 25 cm、电纺液流量250 µL/h 、电压21 kV. 该条件下获得了直径约 300 nm 且分布均一的纳米纤维. 利用 该纳米纤维固定β-D-半乳糖苷酶，固定化反应的最适 pH 值为 4.0 ，此时酶负载量为(15.1±0.5) mg/g. 固定化酶催化2- 硝基苯酚−β-D-半乳吡喃糖苷水解反应的米氏常数Km 2.7 mmol/L ，略大于游离酶的Km 值(2.2 mmol/L)；最大反应速 率 V 为 97.2 µmol/(min⋅mg) ，为游离酶的47.8%. 固定化酶在37 ℃下重复操作21 次后活性损失仅为 15%. 在连续搅 max 拌式反应器中将固定化酶用于催化乳糖的水解反应，连续使用 17 d 仍能稳定运行. 关键词：静电纺丝；纳米纤维；苯乙烯−马来酸酐共聚物；β-D-半乳糖苷酶；乳糖水解 中图分类号：Q554 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2010)04−0743−07 尽管纳米纤维已被用于多种酶的固定，但未见利用 1 前 言 纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的研究. 本工作利用纳 β-D-半乳糖苷酶(β-D-Galactosidase, EC 3.2.1.23)有 米纤维固定β-D-半乳糖苷酶，纳米纤维由苯乙烯−马来 广泛用途，不仅可水解牛奶中的乳糖使乳糖不耐症患者 酸酐共聚物[Poly(styrene-co-maleic anhydride), PSMA] 能直接饮用乳制品[1] ，还可与脂肪醇通过转糖基反应合 通过静电纺丝技术制备而成，对纳米纤维固定β-D-半乳 成重要的表面活性剂烷基糖苷[2]. 在上述应用中，通常 糖苷酶的动力学参数、操作稳定性及连续水解乳糖反应 需要将β-D-半乳糖苷酶固定在载体上以提高其稳定性 体系进行了考察. 结果表明固定在纳米纤维上的酶具有 和重复使用性. 载体材料的性质和固定化方法对催化剂 较高的活性和稳定性，适用于乳糖的连续水解反应. 的催化能力有重要影响. 如Zhou 等[3]和Bayramoglu 等[4] 2 实 验 将该酶分别固定到石墨和微米级磁性粒子上，一定程度 上提高了β-D-半乳糖苷酶的稳定性，但固定化酶的负载 2.1 材料与仪器 量和催化活性较低，在石墨上的固定化量仅为 1.1 苯乙烯−马来酸酐共聚物(分子量 224000)购