毛细管电泳的原理及应用（第三讲）毛细管电泳的柱技术.pdfVIP

讲 座 毛细管电泳的原理及应用* 第（三讲）毛细管电泳的柱技术 王义明 罗国安 清（华大学化学系 清华大学生命科学与牍工程研究院 北京 100084） 将予以介绍。 1 概述 2动态修饰毛细管内壁 毛细管电泳 C（E）的分离和检测过程均在毛细 管内完成，所以说毛细管是CE的核心部件之一。早 毛细管内壁对蛋白质等的吸附主要来源于其表 期对毛细管的研究集中在毛细管直径、长度、形状和 面硅醇基离解形成带负电的吸附点与蛋白质分子中 材料方面。采用细柱可减少电流及自热，而且能加快 带正电荷基团间的静电引力。因此改变EOF和抑制 散热，以保持高效分离；但会造成进样、检测及清洗 吸附可采用：①改变缓冲液pH和离子强度，以抑制 上的困难，也不利于对吸附的抑制，故现在一般采用 硅醇基的离解；②在缓冲液中加入添加剂，使其在内 25～100蘭μm内径的毛细管。增加柱的长度，会使电流 壁形成一动态吸附层 物（理吸附）；③采用化学衍生 减小，分析时间增加 ，但短柱易造成热过载，故一般 或化学键合方法在内壁形成一涂渍层。 常用20～?70cm的长度。常用的毛细管均为圆形，也 采用低pH值pH 3缓冲液以抑制硅醇基的 有采用矩形或扁方形毛细管。矩形管的优点是可以 离解，或使pH值高于所分离的蛋白质的等电点等 加长光径，散热好．比圆柱有较高的分离效率。扁管 措施都能减少吸附[1，但只能解决部分吸附，且无广 可在不降低电泳效率的同时，增大进样量和光径。但 泛适用性。过高或过低的pH还可能引起蛋白质变 异型毛细管价格昂贵，不易推广。毛细管的材料有聚 性。使用高离子强度的缓冲液也能减少蛋白质的吸 丙烯空心纤维、聚四氟乙烯及玻璃、石英等。最常用 附，Green等人[在缓冲液中加入 0.25mol/L的 的是熔融硅胶 石（英）毛细管，这是因为其具有柔软 K2SO4成功地分离了5种标准蛋白。为避免高离子 和良好的光学性质 （能透过紫外光），但石英表面有 强度产生过量焦耳热，Bushey等[3]采用了两性电解 硅醇基团，能产生吸附和形成电渗流 EOFEOF 质三甲铵乙内酯作为添加剂，在0.1mol/LK2S04 在CE分离中起重要作用，需要根据不同的分离要 缓冲液中加入2mol/L三甲铵乙内酯，既减少了吸 求而加以控制。毛细管内壁由于硅醇基的存在而引 附又不增加介质电导，取得了很好的分离效果。但通 起的吸附，在分离生物大分子如蛋白时情况尤为严 常为了控制EOF和抑制吸附，还是采用动态修饰内 重。通常吸附是不可逆的，由此造成基线不稳、重复 壁和表面涂层的方法。 性变差、定性定量困难等一系列危害。因此如何控制 在缓冲液中加入添加剂，如阳离子表面活性剂 电渗流及消除吸附成为毛细管柱研究的重要内容， 十四烷基三甲基溴化铵 TTAB,能在内壁形成物 研究工作十分活跃。本文将介绍通常为达到控制 理吸附层，使EOF反向[4]。其机理是TTAB胶束的 EOF和消除吸附的目的所采用的动态修饰和表面 正电荷端和带负电荷的毛细管壁因库仑引力形成一 涂层两大类方法。另外，还将简单介绍在毛细管凝胶 TTAB的单分子层；其烃基一端面向缓冲液，和溶液 电泳 CGE）中起关键作用的凝胶柱的制备、种类及 中其它TTAB分子的烃基端因范德华引力形成了 无胶筛分的方法。对具有发展前景的填充柱及一些 第二分子层。双