猫角膜内皮中央与周围部端粒酶活性比较及其与增殖潜能关系的研究.pdfVIP

摘 要 目的：比较不同年龄猫角膜内皮周围部和中央部细胞的增殖潜能。将神经胶质瘤细胞 （U251 ）与猫角膜内皮细胞（CECs ）共培养，观察角膜内皮细胞增殖力及细胞周期的变 化，并对共培养后 CECs 的生物学性能进行初步的评估。 方法：实验对象按年龄不同分为幼年猫组和成年猫组，根据各组猫角膜内皮取材部位 不同分为周围部组和中央部组，用实时荧光定量 PCR －染料法检测各组角膜内皮端粒酶活 性，探讨角膜内皮中央部与周围部增殖潜能是否存在差异。U251 细胞、角膜基质细胞分别 与猫角膜内皮细胞 Transwell 体系共培养后倒置相差显微镜观察各组细胞生长情况，通过 流式细胞术检测其细胞周期的变化。共培养后的猫角膜内皮细胞进行 HE 染色观察细胞形 态及核分裂情况。并分别收集共培养后的实验组（U251 细胞与猫角膜内皮细胞共培养）、 阳性对照组（角膜基质细胞与猫角膜内皮细胞共培养）、空白对照组（仅添加培养基的猫 角膜内皮细胞）的猫角膜内皮细胞悬液用实时荧光定量 PCR 法检测端粒酶活性，对各组 CECs 的生物学性能进行初步的评估。 结果：经实时荧光定量PCR检测猫角膜内皮周围部组和中央部组端粒酶活性表达存在 组间差别（F ＝58.51，P ＝0.000 ），周围部组高于中央部组，中央部组仅有微量表达。成年 猫组和幼年猫组组间差别无统计学意义（F=6.21 ，P=0.028 ），即端粒酶活性表达不受年龄 因素影响。U251细胞、角膜基质细胞分别与猫角膜内皮细胞Transwell体系共培养后，流式 细胞检测结果实验组G1期比例显著下降较空白组下降10％，S期比例显著提高较空白组提 高13％，增殖力明显增强。阳性对照组增殖力略微增强。各组共培养后的猫角膜内皮细胞 HE染色观察见实验组细胞数目较对照组明显增多，细胞形态规则，核仁及染色质丰富,偶 见大细胞,但未见明显的核异型性,核浆比例正常。共培养后CECs端粒酶活性检测实验组较 阳性对照组和空白对照组不同程度增高，但其表达量远低于肿瘤细胞（U251 ）组。 结论： （1）猫角膜内皮周围部存在“干细胞样细胞”具有增殖潜能，且其增殖能力 不受年龄因素影响。（2 ）与人神经胶质瘤细胞共培养在一定程度上可促进猫角膜内皮细 胞增殖且增殖的细胞形态、生物学性能无明显异常改变。 关键词：角膜内皮细胞 周围部 中央部 端粒酶 增殖 神经胶质瘤细胞 III Abstract Purpose To compare the proliferative capacity between corneal endothelial cells from the peripheral and central areas of cat corneal . To observe the change of cell proliferative capability and the change of cell cycle after cat corneal endothelial cells (CECs) co-cultured with glioma cells （U251 ）, then make the preliminary evaluation of biological property of co-cultured CECs . Methods Cat corneas were divided into younger group and older group based on cat’s age. We use Real- time fluorescent quantitative PCR to assay the telomerase activity of CECs which were divided into central(0-6.0mm) and peripheral are