基于I环糊精和脱氧胆酸钠二元手性选择剂体系毛细管电泳拆分.pdfVIP

广西师范大学学报 (自然科学版) 2003年 10月 JOURNALOFGUANGXINORMALUNIVERSITY Vol.21 N0. 基于I环糊精和脱氧胆酸钠二元手性选择剂体系 毛细管电泳拆分CBI-氨基酸对映体的研究 沈江珊，赵书林. (广西师范大学 化学化工学院，广西 桂林 541004) 在毛细管电泳手性拆分中，由于二元手性选择剂体系表现出了不同寻常的拆分性能，因而近年来越来 越受到重视C[1-+l.我们在研究中发现，由户环糊精和脱氧胆酸钠组成的二元手性选择剂体系，对禁-2,3一二 甲醛(NDA)衍生的氨基酸((CBI-氨基酸)对映体的手性拆分，具有明显的协同效应，是一种对CBI-氨基酸 具有广谱拆分性能的二元手性选择剂体系.本文对应用该体系手性拆分CBI-氨基酸对映体的各种影响因 素，进行了详细研究.在建立的拆分条件下，16种CBI-氨基酸对映体得到了良好的拆分结果，其分离度均 在 1.5以上. 1 主要仪器与试剂 HPao型高效毛细管电泳仪(Agilent公司);毛细管柱为56cmX50pmi.d.石英毛细管(Agilent公 司)，有效长度为50cm;pHS-3型酸度计(上海雷磁仪器厂). 各种氨基酸和环糊精均为Sigma公司产品，蔡一2,3一二甲醛(NDA)为MolecularProbes公司产品，脱 氧胆酸钠((SDC)为中国医药上海化学试剂公司产品.其余试剂均为分析纯. 2 实验方法 毛细管在每天使用前依次用 1.0mol/I.NaOH溶液冲洗 10min,0.1mol/LHCI溶液冲洗10min,蒸 馏水冲洗 10min，背景电解质溶液((BGE)平衡稳定 10min.在两次运行之间依次用。.1mol/LNaOH溶 液冲洗2min,蒸馏水冲洗2min，用缓冲溶液冲洗2min.采用压力((5X10PaX8s)正极进样，负极紫外 检测，检测波长为254ma，运行电压为20kV，毛细管工作温度为250C.除衍生样品外其他所用的溶液均 须经过。.45Km纤维膜过滤. 3 氨基酸的柱前衍生 取 10川 0.1g/L的氨基酸标准溶液于5001,I的塑料离心管中，然后依次加入 1501,I.100mmol/L 硼砂缓冲溶液(pH9.5),50pL2mmol/L的NDA甲醇溶液和50pL20mmol/I,KCN水溶液，充分摇匀， 室温下静置30min后，引人毛细管电泳系统中进行分离测定.氨基酸衍生过程如图1所示: H 十 R--U--UUOH + UN-一 NH, Fig.1 ReactionofNDAwithaminoacids 4 结果与讨论 对协同作用的各种影响因数，如 手性选择剂的浓度、比例及缓冲剂的浓度和pH值，进行了详细的研 究.在确定的最佳条件下，分别单独使用户CD和SDC及以户CD和SDC的混和物作为手性选择剂时，对 五种有代表性的CBI-氨基酸对映体进行了手性拆分，结果见图2.图2八和B表明，分别单独使用户CD和 SDC作手性选择剂时，五种CBI-氨基酸基本上不具备手性拆分能力.而采用户CD和SDC组成的二元手 基金项 目:国家自然科学基金资助项 目;广西自然科学基金资助项 目(0236013) 作者简介:赵书林 (1957-)，男，湖南慈利人，教授.研究方向:毛细管电泳.E-mail:zhaoshulin001@163.com 广西师范大学学报 (自然科学版) 第 21卷 性选择剂体系时，对五种CB1-氨基酸均具有良好的手性识别作用(见图2c)，其中苯丙氨酸和天冬氨酸的 分离度分别高达 10.6和7.4，这是单独使用这两种手性选择剂所无法达到的，也远优于以往的文献报道 结果. -f. E GIU