生长期下坡跑对去卵巢小鼠骨胶原蛋白、成骨细胞及相关因子的影响研究.pdfVIP

论文摘要 研究目的：研究生长期下坡跑对去卵巢后雌性小鼠体重、摄食量、生化指标、骨 密度(Bone mineral density，BMD) 、COL1mRNA、骨中Ⅰ型胶原蛋白、骨髓间充 质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)和诱导分化产生的成骨细胞(Osteoblast， OB)及OB 成骨能力的影响。本研究通过去卵巢小鼠模拟绝经后妇女，运用RT-PCR、 免疫组织化学染色和细胞原代培养等技术，从生化指标、骨量、蛋白和细胞层面 上较系统地研究生长期下坡跑对去卵巢小鼠骨组织的影响，为青少年时期运动预 防绝经后老年女性骨质疏松症的发生提供理论支持并为预防寻找一种有效的运 动模式。本研究还将为生长期训练在停止一段时间后其作用效果仍然存在提供理 论上的实验依据。 研究方法：将 80 只 4 周龄 C57BL/6 雌性小鼠静养 1 周后随机分为 5 组：安静组 (C 组，n=16) 、运动组(D 组，n=16) 、安静去卵巢组(C+OVX 组，n=16) 、安静假 手术组(C+SHAM 组，n=16)和运动去卵巢组(D+OVX 组，n=16) 。D 组和 D+OVX 组在跑台上进行为期 8 周的下坡跑运动(0.8Km/h， 40min/day ，5 d/week，跑台 坡度为-9°) 。8 周后断颈椎处死 D 组和 C 组小鼠，取血清和相应骨组织检测实 验所做指标。C+OVX 组和 D+OVX 组小鼠在第 8 周后行去卵巢手术，C+SHAM 组行假手术，术后静养 6 周。静养结束后处死三组小鼠进行取材，然后对相应实 验指标进行测试(所测指标两次相同) 。检测指标包括：每周固定时间对小鼠的体 重以及摄食量进行称量；利用试剂盒和酶标仪检测血清中钙、磷和碱性磷酸酶 (ALP)浓度；利用 Hologic Discovery A 骨密度仪扫描小鼠前肢骨 BMD ；利用 RT-PCR 技术检测骨中 COL1 基因的 mRNA 表达；利用石蜡切片和免疫组织化学 染色方法检测骨基质中Ⅰ型胶原蛋白量；将股骨和胫骨骨髓腔中的骨髓间充质干 细胞(MSCs)进行原代培养并诱导其向 OB 分化，利用结晶紫染色检测骨髓腔中总 细胞数，利用 ALP 染色法检测 MSCs 的数量，利用 Von Kossa 染色检测诱导分 化产生的 OB 成骨能力。 实验结果：与 C 组相比，D 组小鼠的体重增长速度慢、摄食量多，血清 ALP 浓 度高(P ﹤0.01)、血钙浓度低(P ﹤0.05)、血磷浓度不存在差异(P0.05)，骨密度值 高(P ﹤0.05)、骨组织中 COL1 表达量明显要高(P ﹤0.01)、骨基质中Ⅰ型胶原蛋白 含量明显高、MSCs 数量增多和 OB 染色面积大且均存在显著性差异。这表明生 长期下坡跑训练对 BMD 、骨组织中 COL1 表达、骨Ⅰ型胶原蛋白、MSCs 和 OB 有较好的促进作用，并且 D 组小鼠 OB 的成骨能力要强。与 C+OVX 组相比， D+OVX 组小鼠的体重和摄食量不存在显著性差异、血清 ALP 浓度高(P ﹤0.01)、 血钙浓度低(P ﹤0.05) 、血磷浓度高(P ﹤0.05) ，骨密度值高(P ﹤0.05) 、骨组织中 COL1mRNA 表达量明显要高(P ﹤0.05) 、骨组织中Ⅰ型胶原蛋白含量明显多、 MSCs 数量增加和 OB 染色面积大，并且 OB 的成骨能力明显要强。这表明生长 期下坡跑运动对去卵巢静养 6 周后的小鼠 BMD 、骨组织中Ⅰ型胶原蛋白、MSCs 和 OB 仍存在促进作用。与 C+SHAM 组相比，D+OVX 组小鼠的体重和摄食量 之间不存在差异，血钙和血磷浓度高(P ﹤0.05)、血液 ALP 浓度降低(P ﹤0.05)、 BMD 平均值低但无差异、COL1 表达量较低无差异、骨组织中Ⅰ型胶原蛋白量 少、MSCs 和 OB 数量少，OB 成骨能力不存在差异；与 C+SHAM 组相比，C+OVX 组小鼠的体重和摄食量之间亦不存在差异，血钙和血磷浓度高(P ﹤0.01) 、血液 ALP 浓度降低(P ﹤0.05)、BMD 值降低(P ﹤0.01)、COL1 表达量较低(P ﹤0.01)、 骨组织中Ⅰ型胶原蛋白量很少、MSCs 和 OB 数量少，OB 成骨能力降低；以上 结果说明，去卵巢后由于雌激素缺乏，对骨组织中合成代谢产生重要影响。但生 长期的下坡跑在一定程度上可以弥补去卵巢后雌激素缺乏对小鼠骨代谢产生的 影响。 C+OVX 组与