烟草花叶病毒丁香分离物的分离与鉴定.pdfVIP

维普资讯 植物病理学报 ACTA PHYT0PATH0L0GICA SINICA 34(3)：215-220(2004) 烟草花叶病毒丁香分离物的分离与鉴定 黄金光 ，邓丛良，范在丰 ，田国忠。，李怀方H (中国农业大学植物病理系，北京 100094； 中国林业科学院森林生态环境保护研究所，北京 100091) 摘要 ：从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物，其在电镜下为约300am×18am的杆状粒子；电泳分析表明感病 组织中dsRNA大约为6．4kbp，而其外壳蛋白分子量约为 17．6kDa。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病 毒属 (Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物 ，进行RT—PCR检测，扩增出约 1000bp的预期特异片段 (GenBankAY566703)。将PCR产物克隆后测序，序列分析表明，与从蚕豆中分离的TMV—B株系序列 (GenBankAJOl1933．1) 同源性为99．9O 。根据烟草花叶病毒 (Tobaccomosaicvirus，TMV)的RNACP基因序列设计引物，进行RT—PCR，扩增出 约 800bp的预期特异片段 (GenBankAY566702)，序列分析表明，与TMV—B株系序列 (GenBankAJOl1933．1)同源性达 99 ，上述实验结果表明，该病毒分离物为 TMV。由于该分离物与TMV—B在指示植物上的症状存在 明显差异，所 以，作者 把该分离物暂命名为 TMV—S。 关键词：丁香；烟草花叶病毒；鉴定 ；序列分析 Isolation and identificatiOn Of Tobacco mosaic virus infecting Syringa oblate HUANGJin—guang ，DENG Cong—liang ，FAN Zai—feng ，TIAN Guo—zhong ，LIHuai—fang (DepartmentofPlantPathology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing 100094，China；ResearchInstituteofForest Ecology，EnvironmentandProtection，ChineseAcademyofForestry，Beijing100091，China) Abstract：Rod—shapedvirusparticlesabout300am ×18am wereisolatedfrom Syringaoblateexpressing systemicmosaicinleaves．Thedouble—strandedRNA patternrevealedonesinglebandofabout6．4kbp． Theviruscontainedcoatproteinofapproximately 17．6kDa．Accordingtotheseresults，thevirusiso— latewasidentifiedasamemberof7 amovirus．A pairofprimersweredesignedbasedonTobamovirus RNA RdRpgene，andafragmentofabout1000bp(GenBankAY566703)wasamplifiedbyRT—PCR． ThePCR productwasclonedandsequenced．Thesequenceshared99．90％ homologywithTMV—B strain (GenBankAccessionNo．AJ011933．1)．AnotherpairofprimerswasdesignedbasedonTMV RNA CPgene．A fragmentofabout800bp(GenBankAY566702)wasamplified．Therecombinantplas— midwasobtainedandsequenced、Thesequenceshared99％ homologywithTMV—Bstrain (GenBank AccessionNo、AJ011933．1)、CPgenesequenceandaminoacidsshared99．37％，100％homologywith TMV—Bstra