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RNA沉默机制研究进展 RNA沉默机制的研究主要集中在遗传和生化方面。遗传方面，各研究小组选择遗传突变子的筛选策略，即筛选RNA干涉功能丧失的突变基因。目前在拟南芥中已发现了SGS1、SGS2、SGS3以及SDE1、SDE2、SDE3和SDE4等多个参与RNA干涉作用的基因，（Elmayan,1998;Dalmay,2000）而在链孢霉中发现产生基因消除所必需的基因QDE1、QDE2和QDE3（Tijsterman,2002）基因序列分析发现，不同生物中RNA干涉相关的必需基因互为同源基因。生化方面，Hamilton 等人率先在发生PTGS的西红柿中检测到了与被沉默基因同源的、大小约为25nt的小片段RNA分子，而未发生PTGS的西红柿却没有检测到这种小分子。（Hamilton，1999）。Zamore等在果蝇RNA干涉实验中观察到，双链RNA首先被降解成21~23nt的小片段，然后相应的mRNA也在与双链RNA同源的区段内，按照同样的间隔被降解成21~23nt的小片段（Zamore，2000）。 RNAi作用分子 目前对于RNA干涉中起作用的RNA小分子已有了比较透彻的研究，这些小分子目前被分为以下几类：一种是小干涉RNA分子（small interfering RNAs，siRNAs）；另一种是微RNA分子（MicroRNAs，miRNAs）；这是两种最主要的作用小分子；最近又有两类参与RNA干涉作用的小分子被发现，分别是微小非编码RNA（Tiny non-coding RNAs,tncRNAs）和小调控RNA分子（Small modulatory RNA,smRNAs）(Victor Ambros,2003; Kuwabara,2004)。tncRNAs是线虫基因组中编码的一类约在20-22nt的RNA分子，它们在进化上并不保守，功能上可能与发育调控有关，具体功能目前还未有报道(Victor Ambros,2003)。smRNAs是2004年初报道的在老鼠中发现的一种RNA小分子，只在成熟神经细胞中调控神经细胞特异基因表达。（Kuwabara,2004) siRNAs小分子 和miRNAs小分子是RNA干涉作用中两种主要的小分子。两者既有不同点，又有许多相似之处。siRNAs是由于Dicer酶类酶切长的双链RNA前体产生的，前体来源于病毒复制本、细胞RNA-依赖的RNA聚合酶(cellular RNA-dependent RNA polymerases,RDRPs)作用的结果或者是基因组内反向重复片段转录的结果,5’端带磷酸基团、3’端带羟基、大小约为21-25nt的RNA分子；miRNAs分子在存在形式上基本与siRNAs分子相同，大小约为19-25nt的RNA分子；但其与siRNAs的关键不同点在于它的来源，它是Dicer酶类加工RNA聚合酶II从内源非编码蛋白基因转录产生的高度结构化的RNA前体分子而成。但两者均依赖于RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complexes,RISC）中的Argonaute蛋白的活性进行（He，2004）。两者的区别： 1）siRNAs以双链形式存在，而成熟的miRNAs是以单链形式存在的； 2）miRNAs参与正常情况下的生长发育基因调控，在大多数的多细胞生物基因组中都有编码，它们沉默蛋白合成阶段的基因，而siRNAs不参与生物体的正常生长，只有在病毒或其它双链RNA诱导的情况下才产生，它们通过与互补序列的精确配对而促进mRNA的切割或招募抑制蛋白、或直接指导DNA的修饰而起作用； 3）Dicer酶对两类RNA分子的加工过程不同；多细胞动物的miRNAs分子是通过Drosha 和Dicer RNase III在细胞核及细胞质分两步分别发生的；而siRNAs则是仅由Dicer酶类作用，而且是在细胞质中加工完成的。 4）miRNAs在多细胞动物界或在有关的植物品种中是保守的，而siRNAs序列是完全多样的，在作用方式上，miRNAs并不需要与它们的靶目标完全匹配，而siRNAs则需要与它们的靶目标完美匹配。（（Dmitry ,2004；Michael,2005） 所有的证据均支持两种小分子是以双链生成的，但在功能复合体中以单链形式集累，最有说服力的证据表明miRNAs分子最初含有两条链的证据是miRNAs的生物合成在植物及多细胞动物中均可被病毒蛋白p19所阻断，而p19蛋白结合双链的RNA小分子结构但并不结合单链的RNA小分子（（Ye，2003；Lakatos，2004），那么p19蛋白抑制miRNAs功能的最简单解释就是miRNAs分子最初是以双链形式短暂存在的。 RNAi效应复合体的组装 RISC组装的关键步骤是将siRNAs和