乙肝病毒L基因与结核杆菌Ag85B基因联合DNA疫苗构建和表达.pdfVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要中文摘要 目的目的：构建乙肝病毒： L 基因与结核杆菌 Ag85B 基因的真核表达载体，检测该表达载体在 目的目的：： 真核细胞中融合蛋白表达情况，为进一步研究乙肝和结核杆菌的新型联合 DNA 疫 苗奠定基础。 方法方法：利用： PCR 技术从 pPIC9K-L 质粒中扩增出 HBV L 基因片段，与pVAX1 DNA 疫苗 方法方法：： 载体进行重组 ，构建 pVL ( 不含终止子) 重组质粒 。然后利用 PCR 技术从 pcDNA3-Ag85B 质粒扩增出 MTB Ag85B 基因，与pVL 质粒(不含终止子)进行重组， 构建真核表达载体 pVLA 。将酶切和测序鉴定正确的重组质粒利用LipofectamineTM 2000 转染 L-02 细胞，通过免疫组织化学法和West blot 检测融合蛋白 L-Ag85B 的表 达。 结果结果: 1、PCR 获得的 HBV L 和 MTB Ag85B 基因片段大小正确，L 基因为 1.2kb，Ag85B 结果结果 基因为 855bp； 2 、成功的构建了pVLA 重组质粒，酶切鉴定片段大小与预计相符，测序结果与报 道一致； 3、重组质粒pVLA 转染 L-02 细胞后，免疫组化检测到了表达融合蛋白的阳性细胞， Western blotting 显示融合蛋白分子量大小正确，约为 78kD 。 结论结论: 成功克隆并构建了含有乙肝病毒L基因与结核分枝杆菌Ag85B基因的真核表达载体 结论结论 pVLA ，并在L-02细胞中成功表达。为进一步研究乙肝、结核联合DNA疫苗在体内的免疫 应答特点和免疫保护效果奠定基础。 关键词关键词：：DNA 疫苗，融合基因，乙肝病毒，结核杆菌， L 基因，Ag85B 基因 关键词关键词：： I Abstract Objective：To construct a eukaryotic expression plasmid containing HBV L gene and MTB Ag85B gene and detect the fusion protein expressed by these expression plasmids in eukaryotic cells so as to lay a foundation for the development of a new type of Hepatitis B-MTB Combined DNA Vaccine. Methods: HBV L gene segments were amplified from pPIC9K-L plasmid by PCR ，and recombined it with pVAX1 DNA vaccine vector to construct pVL (no terminator) recombination vector. MTB Ag85B gene was amplified from pcDNA3-Ag85B plasmid by PCR ，and recombined it with pVL (no terminator) recombination vector to construct an eukaryotic expressing vector pVLA recombination vector. The recombinant plasmids were identified by d