DAPT抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及其机制初探.pdfVIP

DAPT 抑制人肝癌 HepG2 细胞的增殖及其机制初探 硕士研究生： 李玉婷 导 师： 邢飞跃 教授 摘 要 目的： 通过研究 Notch 信号转导通路特异性阻断剂 γ-分泌酶抑制剂 DAPT 对人肝癌细胞 HepG2 细胞株的增殖、凋亡和细胞周期的影响，同时研究 DAPT 对 HepG2 细胞株 NICD 及 ICBP90 蛋白表达的影响，从而探讨 Notch 信号通路在 HepG2 细胞株增殖调控中的作用。 方法： MTT 法检测不同浓度 DAPT 对人肝癌细胞 HepG2 增殖的影响；流式细胞术结合碘 化丙锭(propidiumiodide, PI)染色分析不同浓度及不同时间 DAPT 对 HepG2 细胞周期的影 响；流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI 双染分析不同浓度及不同时间 DAPT 对 HepG2 细 胞凋亡的影响；进而选取最佳浓度 DAPT(5 μmol/L) ，通过Western Blot 检测这一特异性阻 断剂 DAPT 对 HepG2 细胞中 NICD 及 ICBP90 表达的影响。分析 Notch 信号通路在调控 HepG2 细胞增殖中的作用、对细胞周期相关蛋白的影响。 结果：MTT 结果显示，DAPT 能够明显抑制 HepG2 细胞的生长，并呈浓度依赖关系（r=0.86 ， P0.05 ）；终浓度为 5 μmol/L 的 DAPT 对 HepG2 细胞的抑制作用呈时间依赖性(r=0.55 ， P0.05) 。应用流式细胞仪检测细胞周期分布，结果表明DAPT 干预 HepG2 细胞后，G /G 0 1 期细胞分布比例增大，S 期和 G /M 期细胞分布比例减小，细胞积滞于 G /G 期，与 DAPT 2 0 1 作用浓度相关（r=0.90 ，P0.05 ），同作用时间长短关系不大。细胞凋亡结果分析表明，DAPT 能够诱导 HepG2 细胞发生凋亡，且凋亡的诱导程度与给药浓度有关（r=0.32 ，P0.01 ）。 Western Blot 检测显示，DAPT 作用 3 h 后能够降低 HepG2 细胞中 NICD 表达，且随着作用 时间的延长，细胞中NICD 的下调越明显（r=-0.75 ，P0.05 ）；但DAPT 作用 HepG2 细胞 后，细胞中 ICBP90 蛋白的表达呈上调状态，在 24 h 这种上调作用表现更为明显（r=0.96 ， P0.05 ）。 结论：DAPT 能够明显抑制 HepG2 细胞的增殖，且这种抑制作用于 DAPT 的作用浓度及作 用时间有依赖关系。这种对 HepG2 细胞增殖的抑制作用与其使细胞停滞于 G /G 期，阻 0 1 止细胞进入 S 期和 G2/M 期有关，DAPT 体外干预 HepG2 细胞，可以诱导该细胞凋亡，且 II 对细胞中 NICD 的表达有抑制作用。Notch 信号通路的阻断导致 HepG2 细胞生长受抑可能 不是直接通过 ICBP90 所介导。 关键词： DAPT ；肝癌；细胞凋亡；周期阻滞；信号通路；NICD ；ICBP90 III Antiproliferative Effect on Human Hepatocellular Carcinoma Cells by DAPT and its Related Mechanism Master candidate Li Yu-ting