Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节.pdfVIP

中文摘要 目的 探讨Rho 激酶对大鼠海马神经元CRMPsmRNA 表达的调节。 材料和方法 以原代培养的大鼠海马神经元为研究对象，用Rho 激酶激动剂LPA 和抑制剂Y27632 改变细胞内Rho 激酶的活性，应用实时荧光定量PCR方法检测CRMPs mRNA的表达，并 用突起提取试剂盒提取神经元的突起，检测突起生长的变化。 结果 (1) 实时荧光定量PCR方法的建立：总RNA 反转录出的cDNA 作为标准品可以得到 较好的扩增曲线、标准曲线和熔解曲线，相邻扩增曲线间隔均匀，标准曲线显示线性关系 良好(各基因标准曲线相关系数均大于0.98)，各基因扩增效率接近100%，各目的基因与内 参基因扩增效率差值均在5%以内，各基因熔解曲线及电泳结果显示产物特异性强，无引 物二聚体及非特异性扩增。(2) CRMPsmRNA 的表达：各基因在培养的大鼠海马神经元中 均能检测到，对照组分析显示 CRMP1,2,4,5mRNA 表达水平相近且较高，CRMP3mRNA 表达水平相对较低；LPA处理组显示CRMP1,2,3,4 mRNA表达水平与对照组相比趋于增高， 以CRMP1 与CRMP3 mRNA 增多明显，CRMP5 mRNA 表达减少；Y27632 处理组显示 CRMP1,2,3,4 mRNA表达水平与对照组相比趋于减少，以CRMP1 与CRMP3 mRNA减少 明显，CRMP5 mRNA表达无明显变化；LPA预处理后用Y27632干预组，CRMP1-5mRNA 表达均减少，其中CRMP1和CRMP2相比对照组和LPA组均减少明显，CRMP3和CRMP4 相比LPA组减少明显，CRMP5相比对照组减少明显；Y27632 预处理后用LPA干预组， CRMP1-5mRNA表达均减少，其中CRMP1-4相比对照组和LPA组均明显减少，CRMP5 相比对照组减少明显。(3) 突起提取测定结果：对照组细胞突起提取液吸光度值为 0.0426±0.0062，用 LPA处理后的细胞突起提取液吸光度值较对照组降低，差异显著；Y27632 组细胞突起提取液的吸光度值较对照组升高，差异有显著性；LPA预处理后用Y27632 干 预组及用Y27632 预处理后用LPA干预组的细胞突起提取液的吸光度值，较LPA组升高， 差异有显著性，但与对照组比较无显著性差异。 结论 (1) 成功建立了SYBR GreenⅠ相对定量检测 CRMPsmRNA 表达的荧光定量PCR 方 I 法。(2) CRMP1-5mRNA均在大鼠海马神经元表达，其中CRMP1,2,4,5mRNA 表达水平相 近且较高，CRMP3mRNA 表达水平相对较低。(3) 激活Rho 激酶可诱导神经元突起坍塌， 并伴有CRMP1 和CRMP3 mRNA表达增多，CRMP5 mRNA 表达减少；抑制Rho 激酶可 促使神经元突起生长，并伴有CRMP1和CRMP3 mRNA表达减少；激活Rho激酶后再抑 制或抑制Rho 激酶后再激活，神经元突起生长未受到抑制，CRMP1-4mRNA表达均减少。 (4) Rho激酶可以通过调节CRMPsmRNA表达的变化参与介导神经元突起生长。 关键词 Rho 激酶，CRMPs，实时荧光定量PCR，突起生长，神经元，海马，大鼠 II ABSTRACT ABSTRACT AABBSSTTRRAACCTT Objective Objective OObbjjeeccttiivvee To investigate the regulation of expression of CRMPs mRNA byRho kinase in cultured rat hippocampal neurons. Materialsandmethods Materialsandmethods MMaatteerriiaallssaannddmmeetthhooddss Primarily cultured neurons from hippocampus o