肠免疫系统和HIV感染相关免疫学的研究.pdfVIP

中英文摘要 肠免疫系统和HIV感染相关免疫学的研究 硕士研究生：黄秀艳 导 师：曾耀英 研究员 摘 要 本研究旨在探讨肠免疫系统有别于系统免疫系统的特征，在此基础上探讨肠相 关淋巴组织中淋巴细胞对HIV感染的容许性和HIV复制的支持性，最后，探讨AT-2 灭活HIV病毒颗粒在HIV感染时所引起的免疫过度活化的分子基础，为艾滋病以肠 道为靶向的新治疗策略的制定奠定免疫学基础。也就是说，通过此研究初步验证我 们所提出的 “HIV感染肠道免疫系统过度活化论”工作假说。我们的假说认为：在 正常情况下，肠道免疫系统处于生理性活化状态和生理性低反应性状态，其生理性 活化状态为HIV感染提供了大量的易感细胞。而在HIV感染时，由于危险信号的释 放，病毒子模拟APC的作用，调节性T细胞优先被删除等原因导致生理性低反应性 状态被打破，而出现免疫过度活化，从而产生更多的HIV 易感细胞，通过直接感染 以及活化诱导细胞凋亡，使肠道T细胞在短期内大量丢失，从而导致免疫缺陷。为 此，我们进行了三个方面的研究：小鼠肠粘膜免疫系统特点分析；人肠道HIV感染 容许性和HIV复制支持性分析；HIV感染免疫过度活化机理体外实验分析。 论文的第一部分，通过对小鼠派氏集合淋巴结 （PPs）、肠系膜淋巴结 （MLNs） 和腹股沟淋巴结 （ILNs）的比较性研究，以分析小鼠肠道免疫系统的特点。以往的 研究表明，由于肠道是机体营养吸收和共生菌繁殖的主要场所，精确区分入侵病原 微生物和无害的食物和共生菌抗原成为肠粘膜免疫系统的结构和功能进化的原动 力。在功能上，肠道免疫系统能十分清楚地区分哪些是有害的抗原(例如入侵微生 物)，哪些是无害的抗原(例如食物抗原和肠道共生菌)，以便作出合适的免疫应答， 以清除有害的抗原而对无害的抗原形成耐受，以保护机体免受病理性损伤；在结构 上，分为免疫应答 “诱导”部位 (“inductive”sites)和免疫应答 “效应者”部位 (“effector”sites)，前者与免疫应答的启动和免疫耐受的诱导有关，后者参与实 施免疫应答的效应者机制。本部分我们采取了以下的研究方法：无菌分离小鼠PPs、 5 中英文摘要 MLNs 和 ILNs，分别制备单个淋巴细胞悬液，运用流式细胞术结合荧光抗体染色技 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 术来检测CD3 T细胞、CD3 CD4 辅助性T细胞和CD4 CD25 调节性T细胞的比例； 用多克隆刺激剂ConA、PDB 和离子霉素刺激活化淋巴细胞，随后运用流式细胞术 结合双色荧光抗体染色技术来检测T 细胞早期活化标志CD69 的表达水平。结果显 + ＋ ＋ 示：PPs 内CD3 T细胞所占比例明显低于MLNs和ILNs，然而CD3 中CD4 辅助性T ＋ ＋ 细胞的比例三者之间无差异；CD4 CD25 调节性T细胞的比例明显高于MLNs和ILNs； 在没有加入刺激剂的培养条件下，PPs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于MLNs 和ILNs来源的T细胞，MLNs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于ILNs来源的 T细胞；而在加入ConA或者单纯PDB的培养条件下，PPs来源的T细胞却表现出 低反应性；在加入PDB＋Ion的培养条件下， PPs来源T细胞的低反应性被纠正， 但其活化率仍低于同条件下MLNs和ILNs来源的T细胞。我们从此部分的研究中得 ＋ + ＋ 出以下的结论：PPs