促肝细胞生长素和CTGF反义寡核苷酸对肾纤维化的改善作用.pdfVIP

摘 要 目的： 观察促肝细胞生长素（pHGF ）和结缔组织生长因子（CTGF ）反义寡核苷酸 （ASODN ）对人肾小管上皮细胞 HKC 上皮-间质细胞转分化，及对大鼠肾间质 纤维化的作用。 方法： 细胞实验：用巨噬细胞趋化因子-1 和马兜铃酸Ⅰ联合用药诱导建立HKC上皮-间 质细胞转分化模型。分别给与pHGF 、CTGF ASODN和（pHGF+CTGF ASODN ） 联合用药。流式细胞仪检测 12 h、24 h 时HKC细胞凋亡率；RT-PCR方法检测 α-SMA 的mRNA表达水平；细胞免疫组化检测HKC细胞α-SMA、TGF-β 、FN 的 1 蛋白表达水平。 动物实验：48 只清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术空白对照组、手 术模型对照组、CTGF错义寡核苷酸对照组（CTGF MSODN)、pHGF组、CTGF ASODN组、（pHGF+CTGF ASODN ）联合用药组。以上各组造模后给予不同处 理，饲养 14 d，然后处死大鼠。碱水解比色法检测新鲜湿重大鼠肾组织胶原定量； Masson 染色观察肾皮质胶原形态学改变；RT-PCR 检测大鼠肾组织α-SMA 的 mRNA表达水平；免疫组化检测大鼠肾肾皮质α-SMA、TGF-β 、FN蛋白表达水 1 平。 结果： 细胞试验：流式细胞仪检测：24 h模型组细胞凋亡率 9.1 %，浓度为 15、150、1500 ng/ml 的pHGF细胞凋亡率为 3.3 % －4.4 % ，与模型组比较，有显著性差异， p 0.01 ；CTGF ASODN 无显著差异， p0.05 ；RT-PCR 方法：模型组的 α-SMA/GAPDH 比值为 0.91±0.002 ，pHGF 组、CTGF ASODN组和联合用药组 α-SMA/GAPDH 比值分别为0.68±0.015、0.61±0.005、0.65±0.010 。与模型对照组 比较，三者均有统计学意义，p 0.05 。但协同拮抗作用经金正均概率和法分析： Q ＝0.572， 0.85 ，二者为拮抗作用；免疫组化检测：pHGF 、CTGF ASODN和 联合用药均降低α-SMA、TGF-β1、FN蛋白水平。 动物试验：碱水解比色法：湿重肾组织胶原含量UUO模型组均值为 4.85±0.201 I μg/mg，pHGF组均值为 3.76±0.134 μg/mg，CTGF ASODN组均值为 3.34±0.306 μg/mg ，联合用药组为4.06±0.179 μg/mg ，CTGF MSODN错义寡核苷酸对照组为 4.91±0.172 。与UUO模型组比较，pHGF组、CTGF ASODN组及联合用药组均有 显著性差异，p ﹤0.01 。但协同拮抗作用，经金正均概率和法分析：pHGF和CTGF ASODN两种药物的 Q =0.349 ，0.85 ，二者为拮抗作用；②Masson染色：与UUO 模型对照组相比，pHGF 、CTGF ASODN及联合用药组的肾脏着色绿染的胶原纤 维面积明显减少；③RT-PCR检测：UUO模型组α-SMA/β-actin 比值为 1.31±0.049， CTGF ASODN组为 0.77±0.022，有统计学意义，p ﹤0.05 ；④免疫组化：pHGF 、 CTGF ASODN及二者联合用药均明显降低α-SMA、TGF-β 、FN蛋白表达水平。 1 结论： pHGF 和 CTGF ASODN 在离体试验和在体试验，二者均抑制肾小管上皮细 胞的上皮-间质细胞转分化，抑制肾脏间质纤维化。但二者联合用药，没有协同 作用。 关键词： 促肝细胞生长素，结缔组织生长因子，反义寡核苷酸，肾间质纤维化， 上皮-间质细胞转分化