副溶血性弧菌群体感应相关蛋白CqsA的原核表达及结构预测研究.pdfVIP

摘要 摘要 【目的】群体感应是细菌的一种与群体密度相关的基因调控机制，该机制依靠特 殊的信号分子介导调控通路来实现，其中包括信号分子的合成、分泌、积累和检 测。副溶血性弧菌CqsA 是一种推测的信号分子合成酶，其合成的信号分子在群 体感应系统中可能具有重要的调控作用。【方法】本研究从副溶血性弧菌 ATCC17802 的基因组中克隆cqsA 基因，构建重组表达质粒pET22b-cqsA 。测序 后转化大肠杆菌感受态细胞BL21 ，并进行IPTG 诱导表达，通过SDS分 析融合蛋白的表达状况，并进行Western Blotting 验证；同时对测序结果进行分 析：将副溶血性弧菌ATCC17802 CqsA （CqsAATCC17802 ）与霍乱弧菌N16961 CqsA （CqsAN16961 ）进行氨基酸序列比对，利用分子模拟软件Discovery Studio 2.1 对 CqsAATCC17802 进行同源建模及分析。【结果】成功构建的重组质粒经0.6 mM IPTG 诱导4h ，目的基因以包涵体高效表达，表达的融合蛋白大小约为49kD ，与理论 值相符 （437aa ）；经序列比对，发现CqsAATCC17802 与CqsAN16961 的序列一致性为 57.6%，相似性达77.9% ；同源建模结果证实CqsAATCC17802 是一个依赖磷酸吡哆 醛 （PLP ）的酰基转移酶，其单体结构中以 Trp113 、Asp177 、Asp206 、His209 和Lys240 形成的凹槽处存在磷酸吡哆醛结合位点。【结论】本实验成功表达副溶 血性弧菌cqsA 基因，并预测和分析了 CqsA 的结构及功能。本研究推测副溶血 性弧菌CqsA 具有霍乱弧菌CqsA 相似的功能，可能合成类似霍乱弧菌的群体感 应信号分子。本研究为后续寻找副溶血性弧菌群体感应信号分子，进一步探索副 溶血性弧菌群体感应系统奠定了基础。 关键词：副溶血性弧菌； 群体感应；CqsA ；原核表达；结构预测 I 摘要 Abstract [Objective] Quorum sensing, a population-density-related genetic regulatory mechanism, depends on the production, secretion, accumulation, and detection of diffusible signaling molecules called Autoinducers. CqsA, a quorum-sensing-related protein in Vibrio parahaemolyticus, is a putative autoinducer synthase, and the autoinducer synthesized by CqsA maybe is a major regulator in quorum sensing system. [Methods] In this paper, the gene cqsA was cloned from V. parahaemolyticus ATCC17802 and inserted into the expression vector pET22b. After sequencing the recombinant vector pET22b-cqsA was transformed into Escherichia coli BL21 and induced by IPTG, then the fusion protein was analyzed by SDSand verified by Western Blotting. After sequ