茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响及其机制.pdfVIP

茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响及其机制 研究生： 陈笛 导 师： 邢飞跃 教授 [摘要] 目的：研究茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响及其机制。方法：以活 体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色，建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)刺 激下评价小鼠淋巴细胞增殖的模型，通过流式细胞术分析茴香霉素在不同剂量下对体内淋 巴细胞增殖能力的影响；取小鼠外周血单个核细胞，利用荧光标记的单克隆抗体双染技术 + + + 和流式细胞术观察不同剂量的茴香霉素对小鼠体内CD4 Treg 的活化以及CD4 CD25 Treg 数量的影响；观察茴香霉素对体内CD3+T细胞早期及中期活化标志分子CD69 和CD25 表达 的影响。用Luminex液相芯片技术检测小鼠体内血清中白细胞介素 10 （IL-10 ）、白细胞介 素 2 （IL-2 ）、白细胞介素4 （IL-4 ）、白细胞介素6 （IL-6 ）、白细胞介素 12 （IL-12 ）、干 扰素γ （IFN-γ）、转化生长因子β （TGF-β）、肿瘤坏死因子α （TNF-α）的表达水平，检测 体外淋巴细胞上清中IL-10 、IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的表达水平，以探明不同浓度茴香 霉素对小鼠体内外细胞因子表达水平的影响。用MTT法检测茴香霉素作用下淋巴细胞在单 向或双向混合淋巴细胞反应（MLR ）中的反应性，并检测以白细胞介素 2 （IL-2 ）逆转的 淋巴细胞的反应性，以探明茴香霉素免疫抑制作用的可逆性。物理测量不同剂量茴香霉素 对小鼠迟发性超敏反应（DTH ）的影响。建立C57 Balb/c小鼠同种异基因皮肤移植模型， 以环胞霉素(CsA)为阳性对照，观察不同剂量茴香霉素对皮肤移植存活时间的影响。MTT 法检测各剂量茴香霉素对淋巴细胞的抑制率。显微镜检测不同剂量的茴香霉素对小鼠骨髓 微核以及精子畸形的影响。免疫组化法检测多次注射茴香霉素的小鼠的心、肝、脾、肺、 肾的组织形态，以探明茴香霉素的长期毒性。结果：腹腔注射剂量为 5.0 mg/kg～60.0 mg/kg 的茴香霉素能有效抑制ConA对淋巴细胞的促增殖作用(P 0.05) ；相同剂量下，茴香霉素能 有效抑制体内CD3+ + + 淋巴细胞表面分子CD69 和CD25 的表达 （P 0.01 ），并能使CD4 CD25 Treg 明显上调（P 0.01) ；以上剂量的茴香霉素能使小鼠血清中的IL-10 、IL-4 以及TGF-β 明显上升(P0.05) ，IL-2 、IL-12 以及IL-6 表达水平明显下降(P0.01) ，IFN-γ以及TNF-α均 无显著变化。浓度为 1.0 ng/ml～160.0 ng/ml的茴香霉素能使体外培养淋巴细胞的上清IL-10 和IL-4 显著上升(P0.05) ，使IL-2、IFN-γ以及TNF-α的水平极显著下降 本课题受国家自然科学基金项目（No）和广东省自然科学基金项目（No No.5006033 ） 资助. I (P0.01) ；10.0 ng/ml 的茴香霉素能明显抑制单向以及双向 MLR 中淋巴细胞的反应性（P 均0.01 ），其抑制作用与地塞米松比较无明显差异（P 0.05 ）；剂量为 1.0 ng/ml～160.0 ng/ml 的茴香霉素对淋巴细胞的显著抑制作用(P0.05) 可被 50.0 ng/ml 的 IL2 部分逆转； 12.5mg/kg 茴香霉素能够显著延长小鼠皮肤移植存活时间，且明显强于 CsA （P 0.01 ）；以 上剂量的茴香霉素能抑制 DTH 发生。骨髓微核实验表明，60.0 mg/kg 的茴香霉素能显著增 加 Balb/